Временные методические указания по диагностике инфекционной анемии лошадей

Инфекционная анемия – ИНАН (Anemia infectiosa equorum) –остро и хронически протекающая болезнь однокопытных, вызываемая РНК-содержащим вирусом,характеризующаяся постоянной или рецидивирующей лихорадкой, септицемическими явлениями геморрагического диатеза, анемией с уменьшением процента гемоглобина и количества эритроцитов, ускоренным их оседанием, нарушением функции сердечно-сосудистой системы, упадком сил и длительным вирусносительством.

Историческая справка. В 1869 г. во Франции была доказана заразительность данной болезни. Карре и Валле в 1904 г. открыли возбудителя инфекционной анемии. В России болезнь описал в 1910г. М.Потудин.

Инфекционная анемия регистрируется в большинстве стран мира: в Северной и Южной Африке, США, Азии, Австралии и ряде государств Европы. В СССР инфекционная анемия довольно часто наблюдалась в 30-х и 40-х годах. В настоящее время болезнь встречается сравнительно редко.

Экономический ущерб. Коневодство стран, где регистрируют инфекционную анемию, терпит большой экономический ущерб. Летальность при первичных вспышках колеблется от 20 до 80%. Особенно большие расходы вызывает проведение довольно сложных мероприятий по профилактике и ликвидации болезни.

Возбудитель болезни — вирус чаще шарообразной формы с выступающими шипами размером 90-200нм, содержится в крови во всех органах и тканях больных животных, имеет двухконтурную оболочку.

Вирус слабо устойчив к теплу и при 60° теряет вирулентность в течение часа. Кипячение разрушает его через 1-2 минуты, солнечные лучи (20-28°) обезвреживают в течение 1-3 часов. При 0-2° холода вирус сохраняется до двух лет. При биотермической обработке навоза он погибает через 30 дней, в моче и навозной жиже сохраняется до 2,5 месяцев. В высушенной крови в комнатных условиях вирус жизнеспособен в течение семи месяцев. 2%-ный раствор едкого натрия обезвреживают вирус через 20 минут, 3%-ный раствор креолина – через 30 минут; 20%-ная взвесь, приготовленная из извести, содержащей 29,5% активного хлора, обезвреживает вирус в сточных водах через трое суток.

Эпизоотологические данные. В естественных условиях инфекционной анемией болеют лошади всех возрастов, ослы и мулы. У жеребят болезнь часто заканчивается смертью. Ослы более устойчивы к инфекционной анемии, чем лошади: у них болезнь протекает подостро и хронически.

Источником возбудителя инфекции являются больные лошади. Особенно опасны животные с острым течением болезни и хроники в период обострения болезни, так как вирус в организме находится в наибольшей концентрации. Источником возбудителя инфекции могут быть также лошади с латентными формами болезни, у них вирусносительство может продолжаться в течение 7-10 и даже 18лет.

Из организма больной лошади вирус попадает во внешнюю среду с секретами и экскрементами, содержащими белок: мочой, калом, носовой слизью, конъюнктивальным секретом, молоком. Загрязненные выделениями больных корма, вода, навоз, и другие субстраты могут быть факторами передачи возбудителя инфекции.

В организм восприимчивых животных вирус попадает через кожу, слизистые оболочки, пищеварительный тракт. Возможно заражение при случке. Массовым источником распространения инфекции являются кровососущие насекомые, особенно слепни, мухи-жигалки в слюне которых вирус сохраняется 3-4 часа.

Инфекционная анемия чаще встречается в лесисто-болотистых местностях. Здесь она приобретает стационарный характер и отсюда заносится вирусносителями в другие зоны. Два главных фактора определяют понижение резистентности лошадей к инфекционной анемии и распространению этой болезни.

1. В лесисто-болотистых местностях на кислых неполноценных почвах произрастают бедные каротином и минеральными солями растения. Лошади даже летом получают неполноценные корма. Все это проводит к понижению резистентности организма.

2. В указанных местностях летом размножается большое количество кровососущих насекомых (гнус), которые переносят вирус инфекционной анемии от больных животных здоровым. Непрерывно нападая на лошадей, они вызывают сильное перераздражение нервной системы и тем самым резко ослабляют устойчивость организма к инфекционному заболеванию.

Хотя заболевание лошадей инфекционной анемией возможно в течение всего года, зимой и весной бывают обычно спорадические случаи болезни. Иногда они являются результатом непосредственного заражения, но чаще это обострение хронического или латентного течения болезни, вызванные плохими условиями содержания или непрерывной эксплуатацией лошадей.

Массовый лет жалящих насекомых (июль—август) определяет летне — осеннюю сезонность инфекционной анемии, которая возникает среди лошадей чаще на пастбище, но иногда и в конюшнях в виде ограниченных и почти одновременно появляющихся вспышек в тех или иных местах. Массовое заболевание лошадей наблюдается преимущественно в годы с жарким и сухим летом, когда идет процесс обильного размножения жалящих насекомых.

Энзоотия инфекционной анемии продолжается 3-5 месяцев. В начале выделяются животные с острым и даже сверхострым течением болезни. В дальнейшем начинают приобретать хроническое течение и латентные формы. Несоблюдение карантинных мер, а также трудности с выявлением скрытых носителей вируса при перемещении из одних зон в другие крупных партий лошадей ведут к эпизоотическому распространению болезни.

В стационарно неблагополучных пунктах, если туда не поступают лошади из других хозяйств, через 1-2 года случаев явного заболевания не наблюдается. Лошади становятся иммунными и в основной своей массе –вирусносителями (нестерильный иммунитет).

Патогенез. В организм восприимчивых животных вирус проникает в кровь главным образом парентерально. С током крови вирус попадает во все органы и ткани, при этом особенно интенсивно размножается в костном мозге и крови.

В результате раздражения вирусом нервных рецепторов в организме животного происходит рефлекторное включение механизмов защиты.

Организм отвечает лихорадкой, усилением фагоцитарной деятельности клеток ретикулоэндотелиальной системы. Эритроциты, нагруженные вирусом, поглощаются клетками РЭС, но уничтожение вируса при этом не происходит.

Основной симптом болезни – анемия — возникает вследствие угнетения эритропоэза, а также лизиса эритроцитов, подвергшихся воздействию вируса и фагированных клетками РЭС. При этом эритробластическая группа клеток при остром течении инфекционной анемии уменьшается с 40 до 4,6%, а гистиоцитарная группа, клетки которой, становясь макрофагами, пожирают эритроцитов, увеличивается с 3 до 40%.

Что касается угнетения эритропоэза, то этот процесс можно объяснить недостатком в организме цианкоболамина (витамина В12), без которого невозможен нормальный процесс кроветворения.

Вирус инфекционной анемии вызывает сильнейшее раздражение ретикулоэндотелиальной системы организма. Результатом этого является интенсивное размножение и накопление клеток РЭС не только в селезенке, но и в печени, почках и других органах. Как известно, старые эритроциты разрушаются в селезенке, а железосодержащий пигмент эритроцитов-гемосидерин — возвращается для утилизации в красный костный мозг. При инфекционной анемии селезенка, где бурно размножается лимфоидная ткань, постепенно прекращает переработку отмерших эритроцитов. Компенсаторно на себя эту функцию берут другие органы: печень, почки, легкие, клетки РЭС в которых в большом количестве отлагается гемосидерин. Происходит нарушение кругооборота железа в организме больного животного.

Недостаток кислорода в тканях (следствие анемии) вызывает дистрофические и некробиотические процессы в органах. Особенно сильно при этом страдают сердце и печень. Защитной стороной этого процесса является лимфоидная реакция. Дело в том, что лимфоидные клетки являются как раз тем строительным материалом, используя который организм восстанавливает нарушенную целостность ткани. Однако чрезмерная «защита», например в печени, ведет к противоположному результату. Массовое скопление лимфоидных клеток в просветах капилляров и вокруг них вызывает расстройство питания органа. Это сопровождается дальнейшими нарушениями метаболизма и интоксикацией организма веществами, которые обычно обезвреживает печень.

Токсическое действие вируса вызывает гемолиз части эритроцитов в кровяном русле, что не оказывает своего существенного влияния на понижение общего количества эритроцитов. Отсутствие у больных анемией лошадей выраженной желтухи, незначительное увеличение количества билирубина в крови свидетельствует против гемолитической анемии.

Существенное влияние на характер течения болезни и ее исход оказывает состояние реактивности организма. У лошадей в возрасте от 6 до 10лет, нервная система которых сравнительно сильная, отмечается наименьшей летальностью и наибольшим процентом стертых форм болезни. У лошадей моложе этого возраста и старых летальность от инфекционной анемии относительно более высокая.

Усиление виремии ведет к приступам лихорадки.

Течение и симптомы болезни. Инкубационный период при инфекционной анемии в среднем 10-30 дней. В некоторых случаях инкубация может сокращаться до 5дней и растягиваться до 3 месяцев.

Основными признаками болезни являются: лихорадка, слабость и истощение лошади, расстройства сердечной деятельности и изменение картины крови. В зависимости от степени проявления всех этих признаков и быстроты развития процесса различают сверхострое, острое, подострое, хроническое и латентное течение болезни.

Сверхострое течение болезни характеризуется лихорадкой, гастроэнтеритом (геморрагическим), сердечной слабостью, асфиксией. Общее состояние животного тяжелое, оно с трудом передвигается, иногда наблюдается паралич зада. Смерть лошади наступает в течение нескольких часов или через 1-2 дня. В этих случаях болезнь часто смешивают с отравлением или с сибирской язвой.

Острое течение болезни сопровождается быстрым подъемом температуры тела животного до 40-41° и выше. Наблюдается угнетение, но бывает и легкое возбуждение (эйфория). Отмечается гиперемия конъюнктивы и слизистых оболочек носа, рта. Изменения в органах дыхания обычно отсутствуют. Ослабление сердечной деятельности нарастает постепенно. К концу болезни пульс учащен до 100 и больше в минуту, возникают перебои. Сердечный толчок усилен.

Нередко у больной лошади бывают колики, появляется понос, даже с примесью крови, иногда носовое кровотечение. Несмотря на сохраняющийся аппетит у лошадей быстро развивается исхудание.

По мере развития болезни слизистые оболочки глаз, носа, рта, а у кобыл и влагалища становятся бледными, набухшими, маслянистыми, на них часто появляются множественные точечные кровоизлияния. Особенно характерны кровоизлияния на третьем веке и на слизистой возле уздечки языка.
Ослабление сердечной деятельности вызывает у лошадей застойные отеки в области живота, препуция, конечностей. Больные лошади стоят с низко опущенной головой. При движении появляется сильная одышка и сердцебиение, походка становится шаткой.

Острое течение болезни характеризуется быстро развивающейся анемией.

Количество эритроцитов резко снижается до 2-3 и даже 1млн. в 1мм³, кровь становится водянистой и плохо свертывается. Количество гемоглобина уменьшается до 20-30%, реакция оседания эритроцитов (РОЭ) ускорена: 70-80 делений в первые 15 минут. Артериальное давление понижено.

Температура тела на протяжении всего времени болезни остается высокой и только в отдельные дни опускается близко к норме. Длительность острой анемии от 3 до 15 дней, но иногда и месяц.

Подострое течение чаще всего при инфекционной анемии является продолжением острого переболевания лошадей, но может возникнуть и самостоятельно. Подострое течение болезни длится 2-3месяца, в течении которого лихорадка чередуется с периодами, когда температура тела приходит к норме (ремиссия). Бывает до 10 приступов лихорадки продолжительностью 3-5дней. Ремиссии продолжаются 4-15 дней.

В период рецидивов у больных наблюдаются по существу те же признаки, что и при остром течении болезни. Во время ремиссий эти признаки постепенно исчезают, наступает значительное улучшение общего состояния больного. При этом, чем чаще и продолжительнее приступы лихорадки, тем быстрее угасают защитные силы организма и наступает смерть. Исследование крови во время рецидивов дает такие же результаты, что и при остром течении болезни.

Хроническое течение болезни может возникнуть самостоятельно, но чаще всего является продолжением подострого течения. Приступы лихорадки при этом становятся реже и бывают кратковременными. Температура тела повышается до 40-41°, но иногда незначительно. В период рецидивов болезней у больных лошадей отмечается быстрая утомляемость, одышка, сердцебиение, потливость, дрожание мускулатуры. При исследовании крови выявляются следующие изменения: число эритроцитов уменьшается на 1-2 млн., РОЭ ускорена – в первые 15 минут 60-65 делений.

Для хронического течения инфекционной анемии лошадей характерны непродолжительные подъемы температуры тела. Длительность рецидивов болезни 1-3 дня, продолжительность ремиссий 2-3 недели, но иногда и несколько месяцев. При хорошем кормлении и нормальной эксплуатации лошади с хронической анемией могут жить и работать в течение многих лет. Разумеется, таких лошадей, ввиду того, что они являются вирусносителями, можно использовать только в специальных, надежно изолированных хозяйствах, освобождая их во время приступа болезни от работы.

Латентное течение болезни наблюдается у резистентных лошадей и характеризуется одиночными взлетами температуры тела через длительные промежутки времени (несколько месяцев). Такие лошади внешне являются здоровыми, но вирусносителями, и это обстоятельство определяет отношение к ним как к опасным источникам возбудителя инфекции.

Патологоанатомические и гистологические изменения. При вскрытии трупов животных, павших от остро или подостро протекавшей анемии, обнаруживается картина сепсиса. Обращает на себя внимание наличие множественных точечных, пятнистых и полосчатых кровоизлияний на серозных и слизистых оболочках, а также в паренхиматозных органах. Слизистые оболочки глаз, носа, рта и подкожной клетчатки бледны, иногда имеют желтушный оттенок. Лимфатические узлы увеличены и гиперемированы, особенно портальные и селезеночные.

Селезенка при остром течении инфекционной анемии увеличена в 2-3 раза, темно-красного цвета, имеет дряблую консистенцию, поверхность разреза бугристая. При хроническом течении болезни селезенка также несколько увеличена, зерниста. На разрезе видны серовато-белые возвышения (саговость).

Печень при острой анемии увеличена, края ее закруглены. При хроническом течении болезни она имеет нормальную величину, иногда атрофирована, ясно выражена дольчатость. В том случае, если лошадь пала в результате обострения болезни, то печень может быть сильно увеличенной, на разрезе иметь мускатный рисунок (периферия долек серо-желтая, центр красно-коричневый). Сердце увеличено в объеме, под эпикардом и эндокардом обнаруживают кровоизлияния. Сердечная мышца нередко пронизана сероватыми очажками. Почки увеличены в объеме, под фиброзной капсулой и на разрезе встречаются многочисленные точечные кровоизлияния.

В желудочно- кишечном тракте обнаруживают кровоизлияния, как на слизистой оболочке, так и под серозными покровами.

При хроническом течении инфекционной анемии кровоизлияния выражены в меньшей степени, зато встречаются такие характерные для затяжного течения болезни изменения, как рубцы на сердце, индурация (уплотнение) легких, резко выступающие белые фолликулы и гранулированность в селезенке, тромбы в разных сосудах.

При вскрытие трупов лошадей павших в результате повторного приступа болезни, нередко кровоизлияния обнаруживаются одновременно с рубцами в миокарде, что указывает на ранее перенесенные приступы болезни.

При гистологическом исследовании изменения находят во всех паренхиматозных органах и центральной нервной системе.

В легких наблюдается утолщение межальвеолярных перегородок, инфильтрация их лимфоидными клетками, моноцитами, отложение в их цитоплазме гемосидерина.

В миокарде при остром течении имеются кровоизлияния, инфильтрация лимфоидными клетками, моноцитами, гистиоцитами. При хроническом течении, кроме этих клеточных скоплений, встречаются участки размножения фибробластов и образование соединительнотканных рубцов.

В печени наблюдаются дистрофические процессы, в печеночных клетках-пролиферация купферовских клеток и клеток межуточной ткани. Степень проявления этих изменений в различных случаях не одинакова: в одних случаях дистрофические процессы в печеночных клетках отсутствуют, выражено лишь равномерное размножение купферовсих клеток и заполнение капилляров печени лимфоидными клетками, гистиоцитами и моноцитами, содержащими в своей цитоплазме остатки разрушающихся эритроцитов и железосодержащий пигмент, в других — отмечается гнездное размножение клеток ретикулогистиоцитарной системы и отложение в них гемосидерина, в третьих, кроме размножения клеток ретикулогистиоцитарной системы и отложения в них гемосидерина, наблюдаются значительные дистрофические изменения в печеночных клетках некротический распад их, который сильнее выражен вокруг центральных вен.

В почках, кроме кровоизлияний, обнаруживают инфильтрацию лимфоидными клетками и гистиоцитами.

В селезенке при остром течении болезни отмечаются вначале значительные скопления эритроцитов, а в более поздний период-замещение красной пульпы лимфоидными клетками (лимфоцитоз селезенки), уменьшение в ней гемосидерина вплоть до полного его исчезновения.

В головном мозгу муфтообразные скопления круглоядерных клеток вокруг сосудов.

Диагноз на инфекционную анемию ставят на основании анализа комплекса данных. Учитывают эпизоотологические особенности болезни, результаты клинического и гематологического исследований, патологоанатомические и гистологические изменения.

Если инфекционная анемия в хозяйстве установлена, дальнейшая индивидуальная диагностика болезни основывается на клинических и гематологических исследованиях. Эпизоотологические данные собирают непосредственно в хозяйстве. При этом учитывают давность заболевания, характер болезни, пути заноса возбудителя инфекции, динамику заболеваемости и падежа лошадей за несколько предшествующих лет.

Принимают во внимание, что массовые вспышки инфекционной анемии наблюдаются исключительно летом и осенью (июль—сентябрь), а спорадические случаи — в любое время года. Заболевают лошади всех возрастов.

При клиническом исследование учитывают различия течения болезни, рецидивирующий тип лихорадки при подострой и хронической анемии, кровоизлияния на слизистых оболочках, исхудание при нормальном аппетите, шаткость зада, отеки. У больных лошадей повышена возбудимость сердца, что устанавливается функциональной пробой: пробег 50м, подсчет пульса каждые 5 секунд в течение 0,5 минуты. Результат от деления первой цифры подсчета на последнюю цифру у больного анемией лошади должен равняться 2,5- 3.

Для серологического исследования на ИНАН разработаны РСК, РДП, РИФ, РТГА, ИФА и ПЦР. Однако практическое применение в ветлабораториях нашла РДП, при помощи, которой выявляются лошади с острым, хроническим и латентным течением болезни. Реакцией РДП обнаруживают вирусносителей даже через 4-5 лет после переболевания.

Гематологические исследования больных лошадей включают: определение количества гемоглобина, подсчет количества эритроцитов и лейкоцитов, РОЭ, определение лейкоцитарной формулы крови. Исследование крови производят через каждые три дня во время лихорадочных приступов и не реже одного раза в десять дней в периоды ремиссий.

По Я.Е.Колякову (1945), осаждение эритроцитов при удовлетворительной упитанности лошади в первые 15 минут на 70 и более делений с уменьшением столба эритроцитов через час осаждения до 80 и более делений, весьма вероятно, связано с заболеванием лошади инфекционной анемией, при исключении других заболеваний.

При анализе лейкоцитарной формулы следует учитывать, что у здоровых жеребят в возрасте до 4-6 месяцев может иногда наблюдаться повышенный процент лимфоцитов (до 60%).

Дополнительным методом диагностики инфекционной анемии является исследование костномозгового пунктата в динамике болезни. Наиболее характерные изменения появляются во время лихорадки: резкое уменьшение эритробластической группы клеток и увеличение количества клеток гистиоцитарно-моноцитарной группы. В период длительных ремиссий при хроническом течении болезни состояние клеток костного мозга не отличается от такового у здоровых лошадей.

Дифференциальный диагноз. При постановке диагноза на инфекционную анемию нужно исключить сходные по клиническому течению болезни- пироплазмоз, нутталлиоз, трипонозамозы (случная болезнь, суауру), лептоспироз, грипп. Для пироплазмоза характерна сезонность: апрель-май или август – сентябрь. Болезнь протекает остро; при исследовании крови обнаруживают пироплазмы. При нутталиозе максимум больных выделяется в июне; течение острое и подострое. В крови обнаруживаются нутталии. У больных гемоспоридиозами лошадей наблюдается резкая желтушность слизистых оболочек, имеющая стойкий характер; при инфекционной анемии она отсутствует. При гемоспоридиозах с первых же дней наблюдается резкое учащение дыхания — одышка (отек легких); у больных инфекционной анемией со стороны органов дыхания, как правило, особых отклонений от нормы нет. Наконец, при гемоспоридиозах болезнь у жеребят протекает латентно, а при инфекционной анемии — тяжело, сопровождаясь высокой летальностью.

Лептоспироз исключается на основании исследования сыворотки крови больных по реакции микроаглютинации и лизиса, отсутствия лейкоцитоза и лептоспир в моче. Грипп лошадей характеризуется быстрым распространением болезни в конюшне, но протекает благоприятно. При глистных анемиях, вызванных, например, параскаридозом у жеребят, лихорадки обычно не бывает. Копрологическое исследование позволяет выяснить причину страдания.

В особенно затруднительных случаях, когда не хватает комплекса данных, диагноз на инфекционную анемию устанавливают при помощи биологической пробы. Для этой цели используют 2-3 жеребят старше 6 месяцев. Их предварительно в течение месяца исследуют (измерение температуры тела, гематологические и копрологические исследования), исключают нутталиоз, пироплазмоз, сап, паратиф, бруцеллез. Затем жеребятам вводят подкожно 100мл профильтрованной сыворотки от подозрительных по заболеванию инфекционной анемией лошадей. Если нет характерных признаков болезни, жеребят исследуют в течение трех месяцев. Положительной считается биопроба при наличии у подопытных жеребят свойственных инфекционной анемии клиники — гематологических и патогистологических показателей. Если результаты исследований неясны, то рекомендуется производить пассаж на одном жеребенке. Тогда исследование продолжают еще 1,5-2 месяца.

Лечение больных инфекционной анемией лошадей не разработано т.к. почти всегда было безрезультатно в том смысле, что никакими лекарственными препаратами не удавалось стерилизовать организм от вируса. В специальных хозяйствах (анемохозяйства) при наличии хорошего ухода, кормления и правильной эксплуатации хронически и латентно больные лошади могут в течение ряда лет оставаться работоспособными. Во время рецидивов болезни их освобождают от работы. По мере восстановления сил после рецидива болезни лошадей постепенно втягивают в работу. В настоящее время анемохозяйств в нашей стране нет.

Иммунитет. При ИНАН иммунитет нестерильный (премуниция). В крови лошадей обнаруживают комплементсвязывающие, вируснейтрализующие и преципитирующие антитела. Вирус имеет несколько гликопротеидных и полипептидных антигенов. Внутренний из них, Р-24,выявляется в РСК, РИД и РИФ. Во Франции изготовлена вакцина против ИНАН.

Профилактика и меры борьбы основаны на своевременной диагностике и предупреждении заноса вируса в благополучные хозяйства и проводятся в соответствии с инструкцией о мероприятиях по предупреждению и ликвидации инфекционной анемии лошадей, Утвержденной Главным управлением ветеринарии Министерства сельского хозяйства СССР 20 декабря 1982 года.

Мероприятия по профилактике заболевания однокопытных животных инфекционной анемией лошадей.

• При комплектовании хозяйств однокопытными животными их необходимо приобретать из пунктов, благополучных по инфекционной анемии лошадей.
• С целью предупреждения распространения болезни однокопытные животные подлежат исследованию на инфекционную анемию методом диффузной преципитации (РИП). Исследования животных проводят:
  • при их выводе за пределы хозяйств для племенных и пользовательных целей (не более чем за 30 дней до отправки);
  • при поступлении в хозяйство (в период карантинирования). Лошадей, поступивших на предприятия биологической промышленности в качестве доноров или используемых в хозяйствах для получения сыворотки крови и желудочного сока, исследуют 2-х кратно с интервалом в 30 дней, в дальнейшем -2 раза в год: весной-до начала и осенью — по окончании лета кровососущих насекомых;
  • при использовании кобыл для получения кумыса — перед постановкой на раздой.
• Ветеринарные специалисты и руководители хозяйств, при подозрении на заболевание животных инфекционной анемией принимают меры к их изоляции и уточнению диагноза. На предприятиях биологической промышленности прекращают иммунизацию и получение крови от лошадей-продуцентов.

При установлении диагноза на инфекционную анемию лошадей хозяйство (конюшню, ферму, отделение, биопредприятие, населенный пункт) постановлением Губернатора области объявляют неблагополучным по этой болезни и в нем вводят ограничения.

По условиям ограничений запрещается:

• ввод на территорию хозяйства и вывод за его пределы однокопытных животных;
• перегруппировка восприимчивых животных без ведома главного (старшего) ветеринарного врача, обслуживающего это хозяйство;
• реализация полученных от лошадей сывороточных препаратов без их обеззараживания от вируса инфекционной анемии.

Все поголовье лошадей, ослов, мулов и лошаков неблагополучного хозяйства подвергают клиническому осмотру исследуют серологически на инфекционную анемию методом РДП.

Животных, клинически больных инфекционной анемией, убивают и направляют на техническую утилизацию.

Животных, давших при серологическом исследовании на инфекционную анемию положительные или дважды с интервалом в 7-10 дней сомнительные результаты и не имеющих клинических признаков болезни (повышенную температуру тела, отеки, истощение), убивают на санитарной бойне. Мясо, признанное годным в пищу, направляют на обезвреживание проваркой согласно действующим Правилам ветеринарного осмотра убойных животных и ветеринарно-санитарной экспертизы мяса и мясных продуктов.

Шкуры дезинфицируют в соответствии с действующей Инструкцией по дезинфекции сырья животного происхождения и предприятий по его заготовке, хранению и обработке.

Голову, кости и внутренние органы утилизируют.

Остальных однокопытных животных неблагополучного хозяйства, отрицательно реагировавших при исследовании методом РДП на инфекционную анемию, вновь исследуют этим методом с интервалом в 30 дней до получения 2-кратного отрицательного результата по группе.

До оздоровления хозяйства, отрицательно реагирующие при исследовании на инфекционную анемию животные могут быть использованы на работах в пределах неблагополучного пункта.

Молодняк, полученный от положительно реагирующих при серологическом исследовании маток, проверяют в 6-месячном возрасте на инфекционную анемию в РДП 2-кратно с интервалом в 30 дней. При отрицательных результатах 2-кратного исследования его считают здоровым; реагирующий сомнительно при первом или втором исследовании проверяют повторно через 7-10 дней. Положительно и дважды сомнительно реагировавшие животные подлежат убою на санитарной бойне.

На предприятиях биологической промышленности клинически здоровых лошадей-продуцентов, отрицательно реагировавших на инфекционную анемию РДП, продолжают использовать в качестве доноров и одновременно их проверяют дополнительно на это заболевание методом групповой биопробы. Группы не должны превышать 15 голов.

Дезинфекция конюшен, территории вокруг них, упряжи, предметов ухода и навоза при установлении инфекционной анемии проводят в соответствии с действующей Инструкцией по ветеринарной дезинфекции, дезинвазии, дезинсекции и дератизации.

Ограничения с неблагополучного по инфекционной анемии пункта снимают в установленном порядке после убоя больных и положительно реагирующих при исследовании в РДП животных, получения 2-кратных с интервалом в 30 дней отрицательных результатов серологических исследований остального поголовья однокопытных животных в пункте (3-кратных отрицательных результатов серологических исследований и отрицательных результатов групповой биопробы на предприятиях биологической промышленности), а также проведения заключительных мероприятий.

источник

Инфекционная анемия лошадей (лат. —Anemiainfectiosaequorum; англ. —Equineinfectiousanemia; ИНАН) — болезнь однокопытных, характеризующаяся поражением кроветворных органов, рецидивирующей лихорадкой, септическими явлениями, геморрагическим диатезом, анемией с уменьшением содержания гемоглобина и числа эритроцитов, ускоренным их оседанием, упадком сил и длительным вирусоносительством (см. цв. вклейку).

Историческая справка, распространение, степень опасности и ущерб. Впервые ИНАН описал во Франции Лигаей (1843). В 1859 г. Ангиннард экспериментально доказал заразный характер болезни путем введения крови больных анемией здоровым лошадям. Карре и Балле (1904) установили вирусную природу болезни и доказали, что возбудитель содержится в крови и органах больного животного. В 1969 г. Коно выделил вирус в культуре лейкоцитов. В России Помудин сообщал о случаях заболевания лошадей ИНАН в 1910 г. Я. Е. Коляков и соавт. (1932) впервые разработали методы диагностики ИНАН.

Болезнь была широко распространена в периоды Первой и Второй мировых войн. В последнее время, по данным МЭБ, болезнь встречается в США, Австралии, Японии, Индии, в странах Африки, Европы, а также в странах СНГ и в России.

Коневодство стран, где регистрируют инфекционную анемию, терпит большой экономический ущерб. Летальность при первичных вспышках болезни колеблется от 20 до 80 %. Особенно больших расходов требует проведение сложных мероприятий по диагностике, профилактике и ликвидации болезни.

Возбудитель болезни. РНК-содержащий вирус, относящийся к медленным вирусам семействаRetroviridae. Вирионы чаще сферической формы, со средним диаметром 90. 120нм, имеют двухконтурную оболочку.

411Штаммы вируса ИHAH, выделенные в различных частях земного шара, в антигенном отношении идентичны. Вирус культивируется в перевиваемых культурах тканей жеребят, но без признаков ЦПД (ЦПД наблюдают только в культурах лейкоцитов и костного мозга).

К химическим факторам вирус устойчив. При двухчасовой экспозиции в 20%-ном растворе хлорной извести или негашеной извести, в 1%-ных растворах фенола и формалина вирус не погибает. При 0. 2°С возбудитель сохраняется до 3 лет, в глицерине — 7 мес, в моче и навозной жиже — до 2,5 мес, в стерильной воде — 160 дней. Инфицированные корма безопасны через 9 мес. При биотермической обработке навоза вирус инакти-вируется через 30 дней, 2. 4%-ный раствор гидроксида натрия убивает его за 20 мин, 2%-ный раствор формалина — за 5 мин.

Эпизоотология. В естественных условиях ИНАН болеют лошади, ослы и мулы. Источником возбудителя инфекции служат больные животные. Лошади с латентным течением болезни могут быть вирусоносителями в течение 10 лет и более. Из организма больной лошади вирус выделяется с секретами и экскретами, содержащими белок: мочой, калом, носовой слизью, молоком. Факторами передачи служат корма, вода, навоз, подстилка и другие инфицированные объекты. Основной путь заражения — трансмиссивный — через кровососущих насекомых, особенно слепней, в слюне которых вирус сохраняется длительное время. Здоровые лошади могут заболевать ИНАН в результате поступления в организм через кожу даже 0,01 мл зараженной крови. Это обстоятельство позволяет считать кровососущих насекомых (слепней, комаров, мух-жигалок) основным фактором передачи возбудителя инфекции. Этим и объясняется тот факт, что болезнь чаще регистрируется в летнее время (ярко выраженные сезонность и стационарность), в долинах и поймах рек, в лесисто-болотистых местностях. Кроме того, массовое заболевание лошадей наблюдается в годы с жарким и сухим летом.

Вспышка ИНАН обычно продолжается 3. 5 мес. Вначале обнаруживают лошадей, у которых болезнь проявляется остро, в дальнейшем превалируют случаи хронического и латентного течения. Через 1. 2 года случаев выраженной болезни не регистируют, но многие животные остаются вирусоносителями.

Патогенез. Вирус проникает в организм восприимчивых животных главным образом парентерально и разносится по всем органам и тканям. Особенно интенсивно размножается в костном мозге и крови, вызывая угнетение эритропоэза и гемолиз части эритроцитов во время приступа лихорадки. Через 5 дней после заражения число эритроцитов в 1 мкл крови уменьшается до 1,5. 3 млн [(1,5. 3,0) 10 12 /л), в результате показатель гематокрита и содержание гемоглобина уменьшаются на 50%. Уже через 24 ч после заражения скорость оседания эритроцитов (СОЭ) значительно увеличивается. В результате ЦПД вируса на клетки кроветворных органов в крови больных лошадей появляется большое количество чужеродного белка (тканевого антигена), который и индуцирует аллергическое воспаление тканей и усиленную продукцию антител против этих антигенов. Вследствие этого вирус ИНАН присутствует в крови в виде иммунного комплекса вирус + антитело.

Течение и клиническое проявление. Инкубационный период длится чаще от нескольких дней до месяца. Различают сверхострое, острое, под-острое и хроническое течение болезни. В развитии инфекционного процесса характерна определенная цикличность с чередованием периодов обострения (рецидивов) и затухания (ремиссий), что создает в конечном счете многообразие клинического ее проявления.

При сверхостром течении отмечают быстрый подъем температуры тела, геморрагический гастроэнтерит, асфиксию, сердечную слабость, атаксию, параличи задних конечностей и гибель животных через 1. 2 дня.

412Острое течение болезни также характеризуется лихорадкой (41. 42 °С), угнетением, нарушением сердечной деятельности, исхуданием при сохраненном аппетите, набуханием и бледностью конъюнктивы с наличием на ней кровоизлияний, отеками в области живота, препуция, конечностей, шаткостью походки, одышкой, быстрым развитием анемии. Кровь становится водянистой (разжижение), число эритроцитов уменьшается до 1 млн в 1 мкл (1 • 10 12 /л). Содержание гемоглобина снижается до 35. 50 г/л, СОЭ повышена (70. 80 мм в первые 15 мин). Продолжительность болезни 1. 3 нед, иногда 1 мес, после чего животные погибают.

Подострое течение болезни длится 2. 3 мес, сопровождается ремитти-рующей лихорадкой и такими же симптомами в период рецидива, как при остром течении. В период ремиссии указанные признаки постепенно исчезают и животные выглядят здоровыми. Чем чаще и продолжительнее приступы лихорадки, тем быстрее истощаются защитные силы организма, и животные в конце концов погибают.

Хроническое течение болезни чаще является продолжением подострого. Оно характеризуется чередованием лихорадочных периодов (через 1. 3 дня) и продолжительных периодов покоя (ремиссии) длительностью до нескольких месяцев. Во время рецидивов наблюдают те же симптомы, что и при остром течении болезни: утомляемость, одышку, сердцебиение, потливость, тремор мышц, исхудание и гибель животного.

Латентное течение ИНАН отмечают обычно в стационарно неблагополучных пунктах у резистентных лошадей. Для него характерны резкие и кратковременные подъемы температуры тела. Такие животные внешне кажутся здоровыми, но являются вирусоносителями и представляют большую опасность для окружающего поголовья, служат источником возбудителя инфекции. Болезнь может длиться годами, проявляясь иногда лишь заметным исхуданием, быстрой утомляемостью и учащенным сердцебиением при физической нагрузке. В организме латентно больных лошадей вирус может персистировать до конца жизни животного.

Патологоанатомические признаки. На вскрытии у животного, павшего после острого течения болезни, отмечают септические явления. Наблюдаются исхудание, желтушный оттенок конъюнктивы, слизистой оболочки носа. Подкожная и межмышечная клетчатка желтушная, пронизана кровоизлияниями, с зонами студневидного серозно-геморрагического инфильтрата. Лимфатические узлы, особенно портальные и почечные, набухшие, сочные. Селезенка сильно увеличена (спленомегалия), крове-наполнена, с кровоизлияниями под капсулой, пульпа дряблая. Печень увеличена, дряблая, мозаичного цвета. Сердце увеличено, миокард серо-глинистого цвета. В желудочно-кишечном тракте геморрагическое воспаление слизистой оболочки с кровотечениями в полость.

Патологоанатомические изменения при хроническом течении болезни характеризуются истощением, бледностью и желтушностью слизистых оболочек, наличием мелких кровоизлияний на серозных покровах кишечника, сердца, увеличением селезенки и лимфатических узлов. При латентном течении болезни характерных изменений в трупах не обнаруживают.

Наиболее типичные гистологические изменения заметны в печени и селезенке. В капиллярах печени отмечают скопление гистиоцитов, макрофагов и лимфоидных клеток. В макрофагах и в клетках Купфера обнаруживают гемосидерин, в селезенке — сильное инфильтрирование ткани незрелыми эритроцитами.

413Диагностика и дифференциальная диагностика. Диагноз на ИНАН ставят комплексно. Учитывают эпизоотологические особенности, результаты клинического, патологоморфологического, гематологического, серологического исследований и биологической пробы.

Для исследования в ветеринарную лабораторию направляют: сыворотку крови лошадей (5. 6 мл) для серологического исследования; кровь, которую берут до поения и кормления животного (10. 12 мл), стабилизированную 20%-ным раствором цитрата натрия, для гематологического исследования (табл. 5.14); кусочки печени, селезенки, почек, сердца, легких и лимфатических узлов, взятых от павших или убитых с диагностической целью животных для гистологического исследования; сыворотку крови или дефибринированную кровь от подозрительных по заболеванию инфекционной анемией лошадей для постановки биологической пробы.

Серологический метод диагностики основан на обнаружении антител к вирусу в сыворотке крови подозрительных по заболеванию лошадей путем постановки реакции диффузной преципитации (РДП).

источник

Диагноз ставится комплексно, учитывая эпизоотические особенности, результаты клинического и лабораторного исследований, гематологические, патолого-анатомические и гистологические изменения.

Инфекционной анемией лошадей болеют только однокопытные: лошади, пони, ослы и мулы. От больных лошадей здоровым вирус передается через укусы кровососущих насекомых. Основные переносчики – слепни. Случаи возникновения инфекционной анемии регистрируется чаще в летний период, из-за большого количества кровососущих насекомых. Инфекционная анемия регистрируется в болотистой, лесистой местности, бассейнах рек. Случаи заболевания лошадей зимой связаны с обострением болезни у лошадей-хроников или переносом вируса при гемотрансфузиях, вакцинации и других операциях.

Болезнь протекает в виде эпизоотий, часто бессимптомно. Эпизоотическая вспышка ИНАН обычно продолжается 3-5 мес. Вначале обнаруживаются заболевшие лошади, у которых болезнь протекает остро или сверхостро, в дальнейшем наблюдаются случаи хронического течения и латентной (скрытой) формы болезни.

Наиболее характерный признак инфекции – анемия – сопровождается резким уменьшением эритроцитов, гемоглобина, разжижением крови, ухудшением ее свертываемости. Поражается ЦНС, развиваются дистрофические изменения в печени, почках, желудочно-кишечном канале, усиливается распад белков, нарушаются обменные процессы. Развивается угнетаются защитные свойства организма и ретикулоэндотелиальной системы. Смерть наступает в результате резкого нарушения деятельности ЦНС, интоксикации, анемии и паралича сердца.

Лабораторный диагноз на инфекционную анемию устанавливают на основании серологических (реакция диффузионной перципитаци), гематологических и патоморфологических исследований. В сомнительных случаях – ставят биологическую пробу [3,4,5].

Для исследования в ветеринарную лабораторию доставляют: сыворотку крови лошадей (5-6 мл) для серологического исследования, кровь (10-12мл), стабилизированную 20% раствором лимоннокислого натрия для гематологического исследования (кровь берут до кормления и поения лошади), кусочки печени, селезенки, почек, сердца, легких и лимфатических узлов, взятых у павших или убитых с диагностической целью животных для гистологического исследования.

Серологический метод основан на обнаружении антител к вирусу инфекционной анемии в сыворотке крови подозрительных по заболеванию лошадей путем постановления реакции диффузной преципитации. В качестве специфического антигена в реакции используют либо вирус, накопленный на культуре лейкоцитов лошади, либо суспензию селезенки больных лошадей.

При остром течении болезни и коротком инкубационном периоде у исследуемого животного могут быть получены отрицательные результаты. В таком случае кровь повторно исследуют через 10-15 дней.

Гематологические исследования включают определение количества эритроцитов в 1мм 3 крови, количества гемоглобина и скорости оседания эритроцитов (СОЭ).

Для больных лошадей характерна повышенная СОЭ, особенно в первые 15 мин (60-70 делений). СОЭ определяют при комнатной температуре.

В начале заболевания при первом подъеме температуры резкие отклонения от нормы количества эритроцитов и процента гемоглобина, как правило, отсутствуют. У хронически больных животных эти показатели восстанавливаются до нормы, а СОЭ остается повышенной.

При вскрытии трупов лошадей, павших от ИНАН находят множественные кровоизлияния на слизистых оболочках, серозных покровах, в подкожной клетчатке и в паренхиматозных органах. Кровоизлияния могут быть мелкими, точечными или более крупными, до нескольких см в диаметре. При тяжелой форме болезни с явлениями токсикоза находят крупнопятнистые кровоизлияния в слизистой кишечника, дыхательных путей, в мышцах и других тканях.

Для биологической пробы отбирают двух жеребят в возрасте 6-12 месяцев из хозяйств, благополучным по инфекционным болезням. Жеребят заражают сывороткой крови или плазмой.

Наблюдения за зараженными животными ведут в течение 90 дней. Биологическую пробу считают положительной при наличии у зараженных жеребят характерных клинических симптомов заболевания – рецидивирующей лихорадки, слабости, бледности или желтушности слизистых оболочек, исхудания и при получении положительных результатов серологических, гематологических исследований. Биопробу считают отрицательной при отсутствии у подопытных жеребят симптомов болезни и получении отрицательных гематологических и серологических исследований [1].

Лечение инфекционной анемии не разработано, больных лошадей уничтожают. Поэтому переболевшие ИНАН лошади часто приобретают определенную устойчивость к повторному заражению [5].

Библиографический список

Временные методические указания по лабораторной диагностике лошадей (Утверждены 25 марта 1983 г.). – 30 с.

Госманов Р.Г. Ветеринарная вирусология. [Текст] — Учебники и учеб. Пособия для студентов высш. учеб. Заведений / Р.Г. Госманов, Н .М. Колычев — М.: КолосС, 2006. – С. 157-159.

Юров, К.П. Профилактика вирусных болезней лошадей. [Текст] – Учебник / К.П. Юров. — М.: Колос, 1984. — С. 93-117.

Юров, К.П. Вирусные болезни лошадей. [Текст] – Учебник / К.П. Юров, Н.В. Крюков, Н.В. Лихачев — М. 1972. — 141-143с.

Юров, К.П. Вирусные болезни лошадей. [Текст] – Учебник / К.П. Юров, В.Е. Садиков — М.: Колос. 1973. – С. 105-138.

источник

• Автор: Alekx
• Представитель гос. вет. службы
• Откуда: Новосибирск Россия
• Зарегистрирован: 07-01-2008
• Приглашений: 0
• Сообщений: 617
• Пол: Мужской
• Награды:
  
  
• Последний визит:
  19-08-2016 06:05:33

ИНСТРУКЦИЯ О МЕРОПРИЯТИЯХ ПО ПРЕДУПРЕЖДЕНИЮ И ЛИКВИДАЦИИ ИНФЕКЦИОННОЙ АНЕМИИ ЛОШАДЕЙ
(Утверждена Главным управлением ветеринарии Министерства сельского хозяйства СССР 20 декабря 1982 г.)
1. Общие положения
1.1. Инфекционная анемия лошадей — вирусная болезнь однокопытных животных, характеризующаяся острым, подострым и хроническим течением.
При остром и подостром течении отмечаются рецидивирующая лихорадка, поражение сердечно-сосудистой системы с явлениями геморрагического диатеза, анемия, изменения в кроветворных органах.
Хроническое течение болезни характеризуется эритропенией, лимфоцитозом, ускоренной РОЭ, изменениями в печени, сердце и других органах, периодическими подъемами температуры тела.
Большей частью болезнь протекает хронически. Острая и подострая формы регистрируются спорадически. Животные, переболевшие любой формой инфекционной анемии, остаются пожизненными вирусоносителями.
Возбудитель болезни в основном передается кровососущими насекомыми (чаще слепнями).
1.2. Диагноз на инфекционную анемию лошадей устанавливают на основании клинических и патологоанатомических признаков, эпизоотологических данных и результатов лабораторных исследований.
2. Мероприятия по профилактике заболевания однокопытных животных инфекционной анемией лошадей
2.1. При комплектовании хозяйств однокопытными животными их необходимо приобретать из пунктов, благополучных по инфекционной анемии лошадей.
2.2. С целью предупреждения распространения болезни однокопытные животные подлежат исследованию на инфекционную анемию методом реакции диффузионной преципитации (РДП). Исследования животных проводят:
• при их выводе за пределы хозяйств для племенных и пользовательных целей (не более чем за 30 дней до отправки) ;
• при поступлении в хозяйство (в период карантинирования).
Лошадей, поступивших на предприятия биологической промышленности в качестве доноров или используемых в хозяйствах для получения сыворотки крови и желудочного сока, исследуют 2-кратно с интервалом в 30 дней, в дальнейшем — 2 раза в год: весной — до начала и осенью — по окончании лета кровососущих насекомых; при использовании кобыл для получения кумыса — перед постановкой на раздой.
2.3. Ветеринарные специалисты и руководители хозяйств при подозрении на заболевание животных инфекционной анемией принимают меры к их изоляции и уточнению диагноза. На предприятиях биологической промышленности прекращают иммунизацию и получение крови от лошадей-продуцентов.
3. Мероприятия по оздоровлению неблагополучных по инфекционной анемия лошадей пунктов
3.1. При установлении диагноза на инфекционную анемию лошадей хозяйство (конюшню, ферму, отделение, биопредприятие, населенный пункт) в установленном порядке объявляют неблагополучным по этой болезни и в нем вводят ограничения.
3.2. По условиям ограничений запрещается:
• ввод на территорию хозяйства и вывод за его пределы однокопытных животных;
• перегруппировка восприимчивых животных без ведома главного (старшего) ветеринарного врача, обслуживающего это хозяйство;
• реализация полученных от лошадей сывороточных препаратов без их обеззараживания от вируса инфекционной анемии.
3.3. Все поголовье лошадей, ослов, мулов и лошаков неблагополучного хозяйства подвергают клиническому осмотру и исследуют серологически на инфекционную анемию методом РДП.
3.4. Животных, клинически больных инфекционной анемией, убивают и направляют на техническую утилизацию.
3.5. Животных, давших при серологическом исследовании на инфекционную анемию положительные или дважды с интервалом в 7-10 дней сомнительные результаты и не имеющих клинических признаков болезни (повышенную температуру тела, отеки, истощение), убивают на санитарной бойне. Мясо, признанное годным в пищу, направляют на обезвреживание проваркой согласно действующим Правилам ветеринарного осмотра убойных животных и ветеринарно-санитарной экспертизы мяса и мясных продуктов.
Шкуры дезинфицируют в соответствии с действующей Инструкцией по дезинфекции сырья животного происхождения и предприятий по его заготовке, хранению и обработке.
Голову, кости и внутренние органы утилизируют.
3.6. Остальных однокопытных животных неблагополучного хозяйства, отрицательно реагировавших при исследовании методом РДП на инфекционную анемию, вновь исследуют этим методом с интервалом в 30 дней до получения 2-кратного отрицательного результата по группе.
До оздоровления хозяйства отрицательно реагирующие при исследовании на инфекционную анемию животные могут быть использованы на работах в пределах неблагополучного пункта.
3.7. Молодняк, полученный от положительно реагирующих при серологическом исследовании маток, проверяют в 6-месячном возрасте на инфекционную анемию в РДП 2-кратно с интервалом в 30 дней. При отрицательных результатах 2-кратного исследования его считают здоровым; реагирующий сомнительно при первом или втором исследовании проверяют повторно через 7-10 дней. Положительно и дважды сомнительно реагировавшие животные подлежат убою на санитарной бойне в соответствии с п. 3.5 настоящей Инструкции.
3.8. На предприятиях биологической промышленности клинически здоровых лошадей-продуцентов, отрицательно реагировавших на инфекционную анемию в РДП, продолжают использовать в качестве доноров и одновременно их проверяют дополнительно на это заболевание методом групповой биопробы. Группы не должны превышать 15 голов.
3.9. Сывороточные биопрепараты и полуфабрикаты, имевшиеся в наличии на биопредприятии в момент установления диагноза на инфекционную анемию и полученные в период оздоровления от этой болезни, обезвреживают и реализуют в соответствии с п. «а» раздела «5» Основных ветеринарных правил заготовки, содержания животных и закупки яиц, используемых в биологической промышленности, утвержденных Главным управлением ветеринарии Министерства сельского хозяйства СССР 17 августа 1982 г.
3.10. Дезинфекцию конюшен, территории вокруг них, упряжи, предметов Ухода и навоза при установлении инфекционной анемии проводят в соответствии с действующей Инструкцией по ветеринарной дезинфекции, дезинвазии, дезинсекции и дератизации.
3.11. Ограничения с неблагополучного по инфекционной анемии пункта снимают в установленном порядке после убоя больных и положительно реагирующих при исследовании в РДП животных, получения 2-кратных с интервалом в 30 дней отрицательных результатов серологических исследований остальной поголовья однокопытных животных в пункте (3-кратных отрицательных результатов серологических исследований и отрицательных результатов групповой биопробы на предприятиях биологической промышленности), а также проведения заключительных мероприятий

• Автор: Alekx
• Представитель гос. вет. службы
• Откуда: Новосибирск Россия
• Зарегистрирован: 07-01-2008
• Приглашений: 0
• Сообщений: 617
• Пол: Мужской
• Награды:
  
  
• Последний визит:
  19-08-2016 06:05:33

Временные методические указания по лабораторной диагностике инфекционной анемии лошадей.(Утверждены 25 марта 1983 г.)
1. Общие положения.
1.1. Инфекционная анемия лошадей – вирусная болезнь однокопытных животных, характеризующаяся рецидивирующей лихорадкой, анемией, а также бессимптомным вирусоносительством.
1.2. Лабораторный диагноз на инфекционную анемию устанавливают на основании результатов серологических (РДП), гематологических и патоморфологических исследований.
В сомнительных случаях для проверки особо ценных лошадей ставят биологическую пробу. При исследовании сывороток лошадей — продуцентов ставят групповую биопробу.
2. Взятие материала.
2.1. Для исследования в ветеринарную лабораторию доставляют: сыворотку крови лошадей (5-6 мл) для серологического исследования; кровь (10-12 мл), стабилизированную 20%-ным раствором лимоннокислого натрия, для гематологического исследования (кровь берут до поения и кормления животного); кусочки печени, селезенки, почек, сердца, легких и лимфатических узлов, взятых от павших или убитых с диагностической целью животных для гистологического исследования.
2.2. Сыворотку крови или дефибринированную кровь от подозрительных по заболеванию инфекционной анемией лошадей для постановки биопробы берут, как указано в п.6.
3. Серологическое исследование.
3.1. Серологический метод диагностики инфекционной анемии основан на обнаружении антител к вирусу этой болезни в сыворотке крови подозрительных по заболеванию лошадей путем постановки реакции диффузионной преципитации (РДП).
3.2. Исследование проводят в соответствии с «Методикой постановки реакции диффузионной преципитации (РДП) для серологической диагностики инфекционной анемии лошадей» рекомендованной Главным управлением ветеринарии Минсельхоза СССР 5 мая 1977 г.
3.3. Следует иметь в виду, что при остром течении болезни и коротком инкубационном периоде даже при наличии клинических симптомов, характерных для инфекционной анемии, у исследуемого животного могут быть получены отрицательные результаты серологического исследования (антитела в диагностическом титре накапливаются через 2-6 нед. после заражения). В связи с этим в таких случаях исследуют кровь повторно через 1—15 дней.
Необходимо также учитывать, что в случаях длительных ремиссий у хронически больных лошадей или латентного течения болезни положительная РДП может быть и при отсутствии клинических признаков и гематологических показателей.
4. Гематологические исследования.
4.1. Гематологические исследования включают определение количества эритроцитов в 1 мм3 крови, количества гемоглобина и скорости оседания эритроцитов (СОЭ).
4.2. Количество эритроцитов подсчитывают в камере Горяева. В пробирку с 4 мл 3%-ного раствора хлористого натрия вносят 0,02 мл крови. Форменные элементы считают в 80 маленьких или 5 больших квадратах, полученный результат умножают на 10000..
Подсчет эритроцитов можно провести и в электронном счетчике.
4.3. Гемоглобин определяют по общепринятому методу гемометром Сали и полученный результат выражают в г%.
4.4. Для определения СОЭ в эритросидиометр до отметки «0» наливают стабилизированную кровь и каждые 15 мин. учитывают в течение часа, а затем через 24 ч отмечают уровень оседания эритроцитов. Для больных лошадей характерна повышенная СОЭ, особенно в первые 15 мин. (60-70 делений). СОЭ определяют при комнатной температуре.
4.5. Сравнительные показатели крови здоровых и больных лошадей следующие:
Вид исследований / Показатели крови здоровых лошадей при нормальной упитанности / Показатели крови лошадей, больных инфекционной анемией
Эритроциты, млн./мм3 От 5 до 9 4,5 и ниже
Гемоглобин, г% 7,6 5,0 и ниже
СОЭ (делений за 1 ч) 45-60 66 и более
4.6. Следует иметь в виду, что в начале заболевания при первом подъеме температуры резкие отклонения от нормы количества эритроцитов и процента гемоглобина, как правило, отсутствуют. У хронически больных инфекционной анемией животных эти показатели восстанавливаются до нормы, а СОЭ остается повышенной.
4.7. У лошадей с повышенной температурой тела следует исключить наличие нутталий, пироплазм.
5. Методика гистологического исследования.
5.1. Для гистологического исследования готовят срезы и окрашивают их гематоксилин-эозином общепринятым методом.
Срезы для исследования на гемосидерин окрашивают по Перлсу. Для этого срезы из чашки с дистиллированной водой переносят в смесь 2%-ного водного раствора желтой кровяной соли и 1%-ного водного раствора соляной кислоты (в пропорции на 2 капли первого раствора 1 мл второго). В этой смеси срезы выдерживают до появления синей окраски (15-20 мин.), после чего промывают их в течение 10 мин дистиллированной водой, затем докрашивают 10 мин. 1%-ным раствором квасцового кармина. Далее проводят через спирты, карбол-ксилол и заключают в бальзам. Зернышки гемосидерина окрашиваются в голубой или зеленоватый цвет. При окрашивании срезов следует пользоваться только дистиллированной водой и стеклянными иглами (исключают железосодержащие предметы).
6. Постановка биологической пробы.
6.1. Для биологической пробы отбирают двух жеребят в возрасте 6-12 мес. (допускается использование более взрослых животных) из хозяйств, благополучных по инфекционным болезням.
Перед постановкой биопробы жеребят подвергают четырехкратным клинико-гематологическим и серологическим исследованиям с интервалом в 7 дней.
6.2. Для заражения жеребят берут стерильно от наиболее подозрительных по заболеванию инфекционной анемией лошадей кровь в количестве по 300-500 мл от каждой, лучше во время подъема температуры.
6.3. Жеребят заражают сывороткой крови или плазмой. При необходимости их фильтруют через фильтр Зейтца, затем фильтрат проверяют на стерильность и безвредность путем высева на питательные среды (МПБ, МПА, МППБ) и инъекции трем белым мышам подкожно в дозе 1 мл.
Если через 3 дня рост микрофлоры на питательных средах отсутствует и белые мыши остаются живыми, сыворотку крови вводят двум жеребятам подкожно или внутривенно в дозе 100-200 мл каждому. Дефибринированную кровь вводят только подкожно в той же дозе.
6.4. Групповую биопробу проводят путем заражения двух жеребят смесью сыворотки (плазмы) крови 10-15 лошадей-продуцентов. Смесь вводят подкожно в количестве 100-200 мл каждому жеребенку.
6.5. Наблюдения за зараженными животными ведут в течение 90 дней, при этом каждые 10-15 дней проводят гематологические и серологические исследования.
6.6. Биологическую пробу считают положительной при наличии у зараженных жеребят характерных клинических симптомов заболевания – рецидивирующей лихорадки, слабости, бледности или желтушности слизистых оболочек, исхудания и при получении положительных результатов серологических, гематологических исследований.
6.7. Жеребят, давших сомнительные результаты клинико-гематологических и серологических исследований, подвергают убою и исследуют патологоанатомически и гистологически. При положительном результате обнаруживают следующие патологоанатомические изменения: серозно-геморрагическую инфильтрацию подкожной и межмышечной клетчатки, гиперемию и отек лимфоузлов, зернистую или жировую дистрофию скелетной мускулатуры, миокарда, почек, множественные кровоизлияния на слизистых, серозных оболочках и под капсулой органов. Селезенка сильно гиперемирована, увеличена, с выраженной дольчатостью на разрезе, паренхима имеет мускатный рисунок.
Гистологические изменения соответствуют описанным в приложении.
6.8. Биопробу считают отрицательной при отсутствии у подопытных жеребят симптомов болезни и получении отрицательных результатов серологических и гематологических исследований.
7. Сроки исследований: серологического – 7 дней, гематологического – 2, гистологического – 14, биологического- 90 дней.
Приложение Патогистологические изменения при инфекционной анемии.
Характер и степень патогистологических изменений зависит от стадии болезни, количества рецидивов, ремиссий и их продолжительности.
При острой форме болезни обнаруживают: в печени – пролифераты эндотелия синусов и купферовских клеток со скоплением в синусах крупных гистиоцитов, содержащих гемосидерин, гистиоцитарно-лимфоидные пролифераты в междольковой соединительной ткани.
Печеночные клетки в состоянии жировой или зернистой дистрофии; в селезенке – пульпа инфарцирована эритроцитами и обеднена лимфоцитами, количество гемосидерина резко снижено или, наоборот, кровенаполнение слабое, а фолликулы гиперплазированы, количество гемосидерина в норме или несколько повышено; в почках и сердце – гиперемия, кровоизлияния, серозный отек интерстиция, слабые пролифераты гистиоцитарных и лимфоидных клеток, жировая или зернистая дистрофия, иногда небольшие отложения гемосидерина в эндотелиальных клетках и гистиоцитах; лимфатические узлы гиперемированы, с кровоизлияниями; в легких – кровоизлияния под плевру.
Хроническая форма болезни характеризуется следующими изменениями: в печени – диффузные пролифераты лимфоидных клеток и в меньшей степени мелких гистиоцитов, содержащих гемосидерин. У животных, павших в период тяжелого обострения, в печени находят скопления крупных гистиоцитов, нагруженных гемосидерином; в селезенке – диффузная гиперплазия и резкое уменьшение количества гемосидерина или его полное исчезновение. Кроме того, у лошадей, павших во время приступа, в селезенке отмечают повышенное кровенаполнение синусов и очаговое инфарцирование пульпы эритроцитами; в почках — продуктивный гломерулонефрит, сосудистые клубочки увеличены и обогащены ядрами. Между канальцами и вокруг сосудов – скопления лимфоидных клеток. У животных, павших во время тяжелого лихорадочного приступа, в полости капсулы сосудистых клубочков находят серозный, а иногда серозно-геморрагический экссудат, гемосидерин находят в клубочках и гистиоцитах; в сердце – очаговый или диффузный интерстициальный миокардит с преимущественным поражением предсердий (особенно левого); в лимфатических узлах – лимфоцитоз и незначительное отложение гемосидерина; в легких – пролифераты лимфоидных клеток, а также гистиоцитов, нагруженных гемосидерином.
В поздних стадиях болезни в почках отмечают цирроз и склероз сосудистых клубочков. В сердце – миофиброз и склероз миокарда и эндокарда.
В период ремиссий изменения претерпевают обратное развитие или могут отсутствовать, за исключением стойких необратимых процессов: лимфоцитоз паренхимы селезенки, хронический гломерулонефрит, склероз эндо- и миокарда.

• Автор: Alekx
• Представитель гос. вет. службы
• Откуда: Новосибирск Россия
• Зарегистрирован: 07-01-2008
• Приглашений: 0
• Сообщений: 617
• Пол: Мужской
• Награды:
  
  
• Последний визит:
  19-08-2016 06:05:33

Методика постановки реакции диффузионной преципитации (РДП) для серологической диагностики инфекционной анемии лошадей
(Рекомендована Главным управлением ветеринарии Минсельхоза СССР 5 мая 1977 г.)
1. Введение
1.1. Реакция диффузионной преципитации в геле – специфический лабораторный метод, основанный на обнаружении антител к вирусу инфекционной анемии лошадей в сыворотке крови при остром, хроническом и латентном течении инфекции.
1.2. Специфические преципитирующие антитела появляются в крови животных через 2-6 недель после инфицирования и сохраняются на протяжении длительного времени (более 7 лет).
2. Компоненты реакции.
2.1. Для проведения исследований необходимы: преципитирующий антиген; положительная преципитирующая сыворотка; испытуемые сыворотки; очищенный агар «Дифко»; боратный буферный раствор, рН 8,6.
2.2. Антиген и положительная сыворотка представляют собой стерильные лиофилизированные препараты, расфасованные в ампулы и не содержащие активного вируса. На каждой ампуле указывают рабочее разведение антигена или сыворотки. Лиофилизированные препараты сохраняют в холодильнике при температуре 4 С. Срок годности препаратов – 2 года. Он может быть продлен после проверки активности антигена и сыворотки в РДП. Сухие препараты растворяют дистиллированной водой, а рабочие разведения готовят на боратном буфере. После растворения диагностикумы сохраняют при минус 10 С в течение 10 дней.
2.3. Испытуемые сыворотки получают от исследуемых лошадей в количестве 5-6 мл. Их консервируют мертиолятом 1:10000 или путем добавления антибиотиков – пенициллина и стрептомицина по 1000 ЕД/мл и хранят при температуре 4-8 С. Сыворотки без консерванта хранят в замороженном состоянии.
2.4. Боратный буфер готовят по следующей прописи: едкий натр (NaOH) – 2 г; борная кислота (H3BO3) – 11 г; вода дистиллированная до 1 л. Раствор имеет рН 8,6. Используются для реакции химические реактивы «чистые для анализа» (ЧДА).
2.5. Для приготовления агарового геля используют агар «Дифко» и боратный буфер (рН 8,6). 1%-ный и 2%-ный агар готовят путем кипячения или автоклавирования (без давления) в течение 5 мин. В чашку Петри диаметром 9-10 см сначала вносят 5 мл горячего 2%-ного агара и дают ему застыть. Затем, не сдвигая чашек с места, во избежание неравномерного распределения агара, вносят 15 мл (охлажденного до 600С) 1%-ного агара и после застывания среды приступают к вырезанию лунок. Лунки вырезают только в слое 1%-ного агара с помощью металлического пробойника диаметром 7 мм. Одна лунка должна располагаться в центре и шесть – по окружности на расстоянии 3 мм от центральной лунки и друг от друга. Для того чтобы лунки были расположены на равных расстояниях, под чашку необходимо подкладывать трафарет или пользоваться специально изготовленным пробойником из 7 жестко закрепленных трубочек. Агаровые пробки удаляют иглой, пинцетом или канюлей, соединенной с вакуумной установкой. Необходимо избегать удаления и повреждения нижнего 2%-ного слоя агара или расслоения слоев. Если в лунках накапливается влага, то ее отсасывают пипеткой перед внесением реагентов.
3. Постановка реакции.
3.1. Используют 2 схемы заполнения лунок. Первая – в центральную лунку вносят микропипеткой 0,05-0,06 мл антигена. В три периферических лунки, через одну, закапывают 0,05-0,06 мл положительной сыворотки. Оставшиеся три свободные лунки заполняют с помощью тонко оттянутой пастеровской пипетки исследуемыми сыворотками. При этом в одной чашке Петри исследуют 12 проб сыворотки.
3.2. В случае проведения массовых исследований может быть использована вторая схема заполнения лунок, которая позволяет в одной чашке одновременно использовать 16 проб. В центральную лунку вносят антиген, в две периферические, диаметрально противоположные лунки – контрольную положительную сыворотку и в оставшиеся четыре – испытуемые сыворотки. Для каждой пробы сыворотки используют отдельную пастеровскую пипетку.
3.3. Необходимо обращать особое внимание на правильность заполнения лунок. Антиген и сыворотки вносят с таким расчетом, что бы жидкость не растекалась по поверхности агара. После заполнения лунок чашки Петри закрывают крышками и помещают во влажную камеру при температуре 18-25 С.
4. Учет реакции.
4.1. Реакцию учитывают через 48-72 ч. Чашки просматривают на темном фоне в косонаправленном пучке света. Для этой цели используют осветитель ОИ-19. Реакцию учитывают по контрольной линии преципитации, но если она отсутствует или слабо выражена, то исследование необходимо повторить. Контрольные линии преципитации должны быть четкими, расположенными посредине между лунками с антигеном и контрольной положительной сывороткой.
4.2. Существенный сдвиг контрольных линий преципитации при правильном заполнении лунок является показателем снижения активности диагностикумов. В этом случае сухой препарат (антиген или сыворотку) растворяют в 2 раза меньшем объеме дистиллированной воды и проверяют в РДП в разведении 1:1,25; 1:1,5; 1:1,75. За рабочее разведение принимают то разведение диагностикума, которое дает четкую линию преципитации, расположенную посредине между лунками с антигеном и контрольной положительной сывороткой.
4.3. Оценка результатов реакции.
Отрицательная — контрольные линии продолжаются в сторону лунки с испытуемой сывороткой без изгибов или с небольшим изгибом в сторону контрольной положительной сыворотки (рис.3 и 4, лунка 3).
Положительная:
а) между лунками с испытуемой сывороткой и антигеном образуется полоса преципитации, которая соединяется с контрольной линией (рис.3 и 4, лунка 1);
б) линия преципитации отсутствует, но контрольные линии образуют вблизи с испытуемой сывороткой изгиб, направленный в сторону антигена – слабоположительная сыворотка (рис. 3 и 4, лунка 2);
в) контрольные линии укорачиваются со стороны лунки с испытуемой сывороткой, в отдельных случаях контрольные линии полностью растворяются, что свидетельствует о высоком титре антител (рис 3 и 4, лунка 6). Более различимые преципитации будут образовываться, если эти пробы развести 1:4 или 1:8 и повторить реакцию.
Сомнительная реакция – слабый изгиб контрольной линии плохо просматривается; образуются интенсивные неспецифические линии или ореол вокруг лунок, что затрудняет учет реакции.
От животных, давших сомнительную реакцию, через 2-3 недели берут кровь и исследования повторяют. Пробы сыворотки, давшие при повторном исследовании отрицательный результат, считают отрицательными. При получении повторной сомнительной реакции результат исследований считают положительным.
Неспецифическая преципитация образуется с некоторыми пробами сыворотки, особенно полученными от старых лошадей. Признаком неспецифической реакции является перекрещивание линий преципитации с контрольными (рис.3 и 4, лунки 5 и 4). В одной и той же пробе сыворотки могут быть специфические и неспецифические антитела.
4.4. При образовании интенсивного ореола вокруг лунок, затрудняющего учет реакции, эти пробы сыворотки исследуют повторно, добавив к агару 5% хлористого натрия. Для этого к 100 мл буфера добавляют 5 г химически чистого хлористого натрия.
4.5. Жеребят, полученных от положительно реагирующих в РДП кобыл, исследуют после отъема в возрасте 6-8 мес.
4.6. Результаты реакции регистрируются в специальных журналах, которые должны быть прошнурованы, пронумерованы и скреплены печатью учреждения.

источник