Меню Рубрики

Снижение осмотической резистентности эритроцитов характерно для анемии

Анемии, обусловленные эритроцитарными факторами

Мембрана эритроцитов в качестве структурной основы, как и другие биомембраны, имеет бислой фосфолипидов, в котором встроены белки. Внутренняя сторона мембраны эритроцитов связана с сетью миофиламентных белков, формирующих цитоскелет и придающий эритроциту в покое специфическую двояковогнутую форму (рис. 51).

При патологии белков и связей между элементами цитоскелета нарушается форма эритроцита. Дефекты цитоскелета сопровождаются развитием эллиптоцитоза (овалоцитоза), сфероцитоза, стоматоцитоза, акантоцитоза.

    Микросфероцитарная гемолитическая анемия (микросфероцитоз, болезнь Минковского-Шоффара)

Наследственно-семейное заболевание, чаще встречается гетерозиготная форма. Наследуется по аутосомно-доминантному типу. Распространенность заболевания составляет 1:5000 населения. Чаще всего болезнь проявляется в возрасте 3-15 лет, однако нередко клинические признаки выявляются в неонатальном периоде. Могут наблюдаться спорадические формы микросфероцитарной анемии.

Патогенез. При микросфероцитозе описаны разнообразные дефекты состава или функции белков мембраны эритроцитов. Наиболее распространена аутосомная доминантная форма, связанная с нарушением взаимодействия спектрина с актином и белком 4.1 или дефицитом белка 4.2, или с комбинированным дефицитом анкирина и спектрина. Кроме того, описана микросфероцитарная анемия из-за отсутствия спектрина, она наследуется как рецессивная аутосомная мутация. У всех больных отмечается дефицит спектрина. Слабое взаимодействие спектринактин может приводить к фрагментации мембраны, снижению площади поверхности мембраны, повышению ее проницаемости, увеличению содержания в клетке осмотически активных веществ. Наследственный дефект мембраны эритроцита способствует повышению проницаемости ее для ионов натрия, воды, что в конечном итоге изменяет объем клетки.

Формирующийся сфероцит при движении в селезенке испытывает механическое затруднение, длительно задерживается в красной пульпе, теряет способность деформироваться в узких участках кровотока в синусах селезенки. Снижение эластичности мембраны приводит к фрагментации при прохождении эритроцита через капилляры, что сопровождается уменьшением размеров эритроцита. Через 2-3 пассажа через селезенку сфероцит подвергается лизису и фагоцитозу (внутриклеточный гемолиз). Патология эритроцитов проявляется морфологической аномалией — микросфероцитозом, который, по данным одних авторов, выявляется в костном мозге на стадии эритробласта в период гемоглобинизации, по другим — форма эритроцита изменяется в периферической крови. Морфологическая аномалия эритроцитов остается на всю жизнь и в случае удаления селезенки. Микросфероциты имеют укороченные сроки пребывания в крови (до 12-14 дней), пониженную осмотическую и механическую резистентность.

Повышенное разрушение патологических эритроцитов происходит в органах РЭС, главным образом в селезенке. Селезенка задерживает и интенсивно гемолизирует неполноценные эритроциты. Развивается вторичная гиперспления, которая усугубляет гемолитический процесс. После спленэктомии срок пребывания сфероцитов в крови значительно возрастает, приближаясь к нормальным.

Клиника. Основной признак заболевания — гемолитический синдром, который проявляется желтухой, спленомегалией и анемией. В зависимости от формы наследования патологии (гомо- или гетерозиготная передача) болезнь может выявляться в раннем детском возрасте или в более поздние периоды жизни. Возникновение заболевания в детском возрасте нарушает нормальное развитие организма, в результате имеются выраженные клинические признаки: деформация скелета, особенно черепа, рано отмечается увеличение селезенки, общая отсталость развития (спленогенный инфантилизм). При гетерозиготной форме заболевания клинические признаки слабо выражены, но имеют место характерные морфологические изменения эритроцитов (микросфероцитоз). Гемолитический криз возникает под влиянием провоцирующих факторов (инфекция, переохлаждение, переутомление, беременность и др.).

Микросфероцитарная гемолитическая анемия имеет хроническое течение, сопровождается периодическими гемолитическими кризами и ремиссиями. В период криза может повышаться температура, появляется желтуха, увеличиваются размеры селезенки, нередко развивается анемия. В период ремиссии признаки заболевания незначительные. Высокий гемолиз и частые гемолитические кризы способствуют быстрому увеличению размеров селезенки, постоянному увеличению концентрации неконъюгированного билирубина в крови, иктеричности склер. Создаются условия застоя желчи в печени, который иногда приводит к осложнениям гемолитической болезни: образованию пигментных камней в желчном пузыре (желчекаменной болезни), ангиохолециститу и др.

Костный мозг гиперклеточный. Эритроидная гиперплазия наблюдается в плоских костях, диафизах и эпифизах трубчатых костей. Развиваются экстрамедуллярные очаги кроветворения в селезенке и других органах. Костномозговое кроветворение гипер- или регенераторное, следствием чего является увеличение количества миелокариоцитов. Преобладают эритробласты, число которых составляет 60-70% костномозговых клеток, соотношение лейко/эритро — 1:1 и более. Созревание эритробластов и выход эритроцитов на периферию идет ускоренными темпами. При интенсивном кроветворении после тяжелого гемолитического криза в костном мозге могут наблюдаться мегалобласты, очевидно, как следствие недостаточности витамина В12 или усиленного расхода фолиевой кислоты. Очень редко в стернальном пунктате обнаруживается эритробластопения — так называемый арегенераторный криз, который имеет обратимый характер.

Кровь. При выраженном некомпенсированном гемолизе анемия нормохромная. Вместе с тем, анемия долгое время может отсутствовать, однако в периферической крови обнаруживаются полихроматофилия и ретикулоцитоз — признаки активного костномозгового эритропоэза. Эритроциты (микросфероциты) характеризуются небольшим диаметром (в среднем 5 мкм), повышенной толщиной и нормальным объемом (МСV). Средняя толщина увеличена до 2,5-3,0 мкм. Сферический индекс (СФ) — отношение диаметра (d) эритроцита к его толщине (Т) -снижен в среднем до 2,7 (при норме 3,4-3,9). Содержание гемоглобина в эритроцитах в пределах нормы или несколько выше ее. Количество микросфероцитов в период ремиссии и при латентной форме болезни не бывает высоким, в то время как в период криза гемолиз может сопровождаться увеличением их до 30% и выше. Микросфероциты в мазках крови имеют небольшой размер, гиперхромные без центрального просветления (рис. 52).

Эритроцитарная гистограмма дает отклонение влево, в сторону микроцитов, RDW в норме или немного повышен.

Особенностью микросфероцитарной гемолитической анемии является постоянно повышенный гемолиз, который сопровождается ретикулоцитозом. В период гемолитического криза количество ретикулоцитов достигает 50-80% и больше, в ремиссии — не превышает 2-4%. Ретикулоциты обладают большим диаметром при нормальной толщине. Могут появляться эритрокариоциты. Гемолитический криз сопровождается небольшим нейтрофильным лейкоцитозом. Тромбоцитарный росток, как правило, не изменен. СОЭ в период криза повышена.

Одним из характерных признаков заболевания является снижение осмотической устойчивости эритроцитов. В норме начало гемолиза отмечается при концентрации NаСl 0,5-0,45%, а полный гемолиз при 0,4-0,35% NаСl. При сфероцитозе показатели резко снижены: гемолиз начинается при 0,7-0,6% NаСl (минимальная стойкость). Максимальная стойкость обычно повышена — полный гемолиз происходит при 0,3-0,4% NаСl. Среди больных микросфероцитарной гемолитической анемией встречаются лица, у которых, несмотря на явный сфероцитоз, осмотическая резистентность эритроцитов нормальная. В этих случаях необходимо исследовать резистентность эритроцитов по отношению к гипотоническим солевым растворам после предварительной их инкубации в течение двух суток. Спленэктомия не устраняет сниженной осмотической и механической устойчивости эритроцитов.

Развитию спленомегалии с синдромом гиперспленизма сопутствует лейкопения, нейтропения и нередко нерезко выраженная тромбоцитопения. Отмечается снижение гаптоглобина. Последствия высокого гемолиза: билирубинемия с преобладанием неконъюгированного билирубина, в моче увеличено содержание уробилиногена, моча имеет коричнево-красный оттенок, каловые массы резко окрашены из-за большого количества стеркобилиногена.

Овалоцитарная гемолитическая анемия (овалоклеточная, наследственный овалоцитоз, эллиптоцитоз)

Редкая форма болезни, наследуется по аутосомно-доминантному типу. Возникает, как правило, из-за молекулярного дефекта белков «скелета» мембраны, одним из которых является спектрин. Описано до 20 различных аномалий белков мембраны. В зависимости от гетеро- или гомозиготной передачи возможны различные клинические и гематологические проявления болезни.

Патогенез. В основе заболевания лежит патология мембраны эритроцитов. Продолжительность жизни овалоцитов в организме укорочена. Заболевание характеризуется внутриклеточным гемолизом с преимущественным разрушением эритроцитов в селезенке.

Клиника. Как аномалия овалоцитоз в большинстве случаев представляет собой бессимптомное носительство без клинических проявлений. При гомозиготной форме клинические признаки овалоцитарной анемии практически не отличаются от микросфероцитоза. Заболевание характеризуется хроническим нетяжелым течением с гемолитическими кризами, сопровождающимися компенсированным или декомпенсированным гемолизом, желтухой и анемией, уровень которой зависит от компенсаторных возможностей эритропоэза. Больным свойственны спленомегалия, конституциональные изменения скелета, в частности черепа, возможны трофические язвы голени и другие симптомы, которые могут наблюдаться при микросфероцитарной гемолитической анемии.

В костном мозге характерен регенераторный или гиперрегенераторный тип кроветворения с преобладанием эритробластов. Соотношение лейко/эритро составляет 1:3 и более за счет эритробластов в зависимости от активности гемолиза и костномозгового кроветворения.

Кровь. Анемия носит нормохромный характер с высоким ретикулоцитозом. Овалоциты имеют нормальный средний объем (МСV) и среднее содержание гемоглобина (МСН). Наибольший диаметр эритроцитов достигает 12 мкм, наименьший — 2 мкм (рис. 53, 54). Овалоцитоз эритроцитов может составлять от 10 до 40-50% клеток при гетерозиготном носительстве и до 96% эритроцитов при полном носительстве аномальных генов. Осмотическая резистентность овалоцитов понижена, повышен аутогемолиз, СОЭ ускорена.

Овалоцитоз как симптоматическая форма (с небольшим числом овалоцитов) может встречаться при различных патологических состояниях, главным образом при гемолитических анемиях, миелодиспластическом синдроме. Известно сочетание овалоцитоза с серповидноклеточной анемией, талассемией, пернициозной анемией. В таких случаях овалоцитоз носит временный характер и исчезает при эффективной терапии основного заболевания. Поэтому к истинному овалоцитозу следует относить лишь те случаи, при которых не менее 10% эритроцитов имеют овальную форму.

Стоматоцитарная гемолитическая анемия (стоматоцитоз)

Редкая форма заболевания, наследуется по аутосомно-доминантному типу.

Патогенез. В основе заболевания лежит нарушение структуры мембраны эритроцитов. Аномалия эритроцитов сопровождается повышенным их разрушением в РЭС (главным образом в селезенке) вследствие внутриклеточного гемолиза.

Клиника может быть с различными проявлениями: от полной компенсации у носителей патологического гена до тяжелой гемолитической анемии, напоминающей микросфероцитоз. Внутриклеточный гемолиз эритроцитов сопровождается увеличением селезенки, желтухой, имеет место склонность к образованию камней и изменениям скелета.

Костный мозг гиперклеточный за счет расширенного красного ростка. Показатели костномозгового кроветворения зависят от степени выраженности гемолиза и активности эритропоэза. Ремиссия может не сопровождаться анемией, в период криза анемия носит, как правило, регенераторный или гиперрегенераторный характер.

Кровь. Морфологическая особенность болезни — стоматоцитоз (рис. 55), который характеризуется наличием в центре клетки неокрашенного участка в виде вытянутой светлой полосы, напоминающей форму рта (Stoma — рот) или округлой формы. Объем эритроцитов и концентрация гемоглобина не отличаются от нормы, резистентность эритроцитов может быть понижена. В период тяжелых гемолитических кризов наблюдается низкий уровень гемоглобина и эритроцитов. Анемия сопровождается повышенным содержанием ретикулоцитов и неконъюгированного билирубина.

Гемолитические анемии, обусловленные нарушением структуры липидов мембраны эритроцитов (акантоцитоз)

Редкое заболевание, наследуется по аутосомно-рецессивному типу.

Патогенез. Заболевание связано с нарушением липидного обмена. Снижение содержания холестерина, триглицеридов, фосфолипидов в крови отражается на липидном составе мембраны эритроцитов, в них снижена концентрация лецитина, фосфатидилхолина, повышено содержание сфингомиелина; уровень холестерина нормальный, либо повышен, а содержание фосфолипидов нормальное или уменьшено. Все эти нарушения в эритроцитах способствуют снижению текучести мембраны и изменению их формы. Эритроциты приобретают зубчатый контур, похожий на листья аканта, поэтому их называют акантоцитами. Аномальные эритроциты разрушаются главным образом в селезенке вследствие внутриклеточного гемолиза.

В клинике имеют место признаки анемии, гемолиза эритроцитов, симптомы нарушения обмена липидов: пигментный ретинит, нистагм глаз, тремор рук, атаксическая походка.

Кровь. Анемия нормохромная нормоцитарная. Основным морфологическим признаком этой формы гемолитической анемии являются эритроциты с зубчатым контуром — акантоциты (рис. 56), которые могут составлять до 40-80% эритроцитов. Отмечается ретикулоцитоз. Осмотическая стойкость эритроцитов нормальная или сниженная. Количество лейкоцитов и тромбоцитов в пределах нормы.

В костном мозге — гиперплазия клеточных элементов эритропоэза.

Эритроциты такой же формы встречаются при циррозе печени, у пациентов, находящихся на АИК, космонавтов после приземления.

  1. Беркоу Р. Руководство по медицине The Merck manual. — М.: Мир, 1997.
  2. Руководство по гематологии / Под ред. А.И. Воробьева. — М.: Медицина, 1985.
  3. Долгов В.В., Луговская С.А., Почтарь М.Е., Шевченко Н.Г. Лабораторная диагностика нарушений обмена железа: Учебное пособие. — М., 1996.
  4. Козинец Г.И., Макаров В.А. Исследование системы крови в клинической практике. — М.: Триада-Х, 1997.
  5. Козинец Г.И. Физиологические системы организма человека, основные показатели. — М., Триада-Х, 2000.
  6. Козинец Г.И., Хакимова Я.Х., Быкова И.А. и др. Цитологические особенности эритрона при анемиях. — Ташкент: Медицина, 1988.
  7. Маршалл В.Дж. Клиническая биохимия. — М.-СПб., 1999.
  8. Мосягина Е.Н., Владимирская Е.Б., Торубарова Н.А., Мызина Н.В. Кинетика форменных элементов крови. — М.: Медицина, 1976.
  9. Рябое С.И., Шостка Г.Д. Молекулярно-генетические аспекты эритропоэза. — М.: Медицина, 1973.
  10. Наследственные анемии и гемоглобинопатии / Под ред. Ю.Н. Токарева, С.Р. Холлан, Ф. Корраля-Альмонте. — М.: Медицина, 1983.
  11. Троицкая О.В., Юшкова Н.М., Волкова Н.В. Гемоглобинопатии. — М.: Изд-во Российского университета дружбы народов, 1996.
  12. Шиффман Ф.Дж. Патофизиология крови. — М.-СПб., 2000.
  13. Baynes J., Dominiczak M.H. Medical Biochemistry. — L.: Mosby, 1999.

Источник: В.В.Долгов, С.А.Луговская, В.Т.Морозова, М.Е.Почтарь. Лабораторная диагностика анемий: Пособие для врачей. — Тверь: «Губернская медицина», 2001

источник

Дифференциальная диагностика анемий: Методическая разработка для проведения практического занятия , страница 22

а. наследственный микросфероцитоз

г. болезнь Маркиафава-Микели

д. аутоиммунная гемолитическая анемия

042. Какие лабораторные показатели характерны для гемолиза?

б. уменьшение продолжительности жизни эритроцитов

г. повышение уровня прямого билирубина

д. повышение уровня непрямого билирубина

043. Для диагностики гемолитической анемии необходимо:

а. исследование уровня гемоглобина и эритроцитов

б. подсчет числа ретикулоцитов

д. все перечисленное верно

044. Для наследственного сфероцитоза характерно:

г. склонность к образованию камней в желчном пузыре

Правильный ответ: а, б, в, г, д

Читайте также:  Что пить при анемии жидкость

045. Что из перечисленного верно в отношении диагностики аутоиммунной гемолитичес-кой анемии?

а. отрицательная проба Кумбса не исключает аутоиммунную гемолитическую анемию

б. агрегат-гемагглютинационная проба более информативная

для диагностики гемолитической аутоиммунной анемии

в. агрегат-гемагглютинационная проба обязательный признак ауто иммунной гемолити-ческой анемии

046. Наиболее часто гемолитическая анемия, вызываемая медикаментами, возникает у па-циентов с дефицитом каких ферментов?

047. Повышенный гемолиз проявляется следующими признаками, кроме:

а) отсутствие или снижение гаптоглобина в сыворотке

д) укорочение продолжительности жизни эритроцитов

048. На повышенный гемолиз указывают все показатели, кроме:

а) гаптоглобин сыворотки отсутствует или снижен

в) увеличение уровня ЛДГ сыворотки

д) укорочение продолжительности жизни эритроцитов

049. Следующие медикаменты могут вызвать гемолитическую анемию, кроме:

050. Все факторы могут приводить к повышенному гемолизу, кроме:

а) изменение структуры гемоглобина

б) нарушение устойчивости или проницаемости мембран эритроцитов

г) недостаточность гаптоглобина плазмы

051. Все признаки характерны для болезни Минковского-Шоффара, кроме:

б) снижение осмотической стойкости эритроцитов

д) положительная проба Кумбса

052. Что неверно в отношении наследственного сфероцитоза?

а) имеется дефицит глюкуронилтрансфсразы

б) основной дефект-наличие аномальных клеток-микросфероцитов

в) спленэктомия высоко эффективна

г) осмотическая стойкость эритроцитов снижена

053. У больного периодически желтушность кожных покровов. При осмотре: «башенный череп», «готическое небо». Ан. крови: Нв 106 г/л, эритроциты — 3,3 млн/мл. Для уточнения диагноза необходимо:

а) определение уровня общего и связанного билирубина

б) осмотическая стойкость эритроцитов

в) определение размеров селезенки

г) определение числа ретикулоцитов

054. Снижение осмотической стойкости эритроцитов характерно:

а) для аутоиммунной гемолитической анемии

б) для наследственного сфероцитоза

г) для пароксизмальной ночной гемоглобинурии

д) для сидероахрестической анемии

055. У больного периодически возникает желтушность кожных покровов. При осмотре: «башенный череп», «готическое небо». В крови: Нв 106 эр. 3,3 в остальном без особенностей. В периферической крови ожидаются следующие изменения, кроме:

а) микросфероцитоз эритроцитов

в) увеличение осмотической стойкости эритроцитов

г) увеличение уровня железа

д) увеличение непрямого билирубина

056. При каком заболевании наблюдается увеличение гемоглобина F (или А2)?

а) серповидно-клеточная анемия

в) дефицит глюкокозо-6-фосфатдегидрогеназы

г) пароксизмальная ночная гемоглобинурия

д) наследственный сфероцитоз

057. Что неверно в отношении аутоиммунной гемолитической анемии?

а) эритроциты разрушаются агглютининами и аутогемолизинами

б) проба Кумбса положительная

в) осмотическая стойкость эритроцитов снижена

г) при неэффективности стероидов показана спленэктомия

058. Подберите соответствующую характеристику наследственного сфероцитоза:

а) кожный зуд и светлый кал

б) нерезкая желтуха без зуда, с нормальной окраской мочи

в) лихорадка с ознобом, темный цвет мочи

г) выраженные синдромы цитолиза, воспаления и темная моча

д) микросфероцитоз и снижение осмотической стойкости эритроцитов

059. У б-го после ОРЗ потемнение мочи, желтушность кожи. Обнаружены увеличенные печень и селезенка. Нв 100 эр. 3,0 тр. 115,0 лейкоциты 7,0 рет. 2,5%. Бил. 38 мкмоль. Пр. Хема (-), пр. Кумбса ++++. Ан. мочи: ед.эритроциты. Диагноз?

а) железодефицитная анемия

в) наследственный сфероцитоз

г) аутоиммунная гемолитическая анемия с внутрисосудистым гемолизом

д) болезнь Маркиафава-Микели

060. У больного периодически желтушность кожных покровов. При осмотре: «башенный череп», «готическое небо». В крови: Нв 106 эр. 3,3, в остальном — без особенностей. Наиболее вероятный диагноз?

а) энзимодефицитная гемолитическая анемия

б) наследственный сфероцитоз

в) аутоиммунная гемолитическая анемия

г) ночная пароксизмальная гемоглобинурия

д) железодефицитная анемия

061. У больного легкая желтушность, слабость. После сильного переохлаждения озноб, ноющие боли в подреберьях, температуру 37,8. Высокое небо, башенный череп. Печень и селезенка увеличены. Нв 95 ср. диаметр эритроцита 6,3 мкм, цв. пок. 0,8 рет. 6,1%, тр.240,0 лейкоциты 9,0 СОЭ 25. Билирубин 54, прямой 5,5. Пробы Хема и Кумбса (-). Миелограмма: выраженная гиперплазия красного ростка. Диагноз:

  • АлтГТУ 419
  • АлтГУ 113
  • АмПГУ 296
  • АГТУ 266
  • БИТТУ 794
  • БГТУ «Военмех» 1191
  • БГМУ 172
  • БГТУ 602
  • БГУ 153
  • БГУИР 391
  • БелГУТ 4908
  • БГЭУ 962
  • БНТУ 1070
  • БТЭУ ПК 689
  • БрГУ 179
  • ВНТУ 119
  • ВГУЭС 426
  • ВлГУ 645
  • ВМедА 611
  • ВолгГТУ 235
  • ВНУ им. Даля 166
  • ВЗФЭИ 245
  • ВятГСХА 101
  • ВятГГУ 139
  • ВятГУ 559
  • ГГДСК 171
  • ГомГМК 501
  • ГГМУ 1967
  • ГГТУ им. Сухого 4467
  • ГГУ им. Скорины 1590
  • ГМА им. Макарова 300
  • ДГПУ 159
  • ДальГАУ 279
  • ДВГГУ 134
  • ДВГМУ 409
  • ДВГТУ 936
  • ДВГУПС 305
  • ДВФУ 949
  • ДонГТУ 497
  • ДИТМ МНТУ 109
  • ИвГМА 488
  • ИГХТУ 130
  • ИжГТУ 143
  • КемГППК 171
  • КемГУ 507
  • КГМТУ 269
  • КировАТ 147
  • КГКСЭП 407
  • КГТА им. Дегтярева 174
  • КнАГТУ 2909
  • КрасГАУ 370
  • КрасГМУ 630
  • КГПУ им. Астафьева 133
  • КГТУ (СФУ) 567
  • КГТЭИ (СФУ) 112
  • КПК №2 177
  • КубГТУ 139
  • КубГУ 107
  • КузГПА 182
  • КузГТУ 789
  • МГТУ им. Носова 367
  • МГЭУ им. Сахарова 232
  • МГЭК 249
  • МГПУ 165
  • МАИ 144
  • МАДИ 151
  • МГИУ 1179
  • МГОУ 121
  • МГСУ 330
  • МГУ 273
  • МГУКИ 101
  • МГУПИ 225
  • МГУПС (МИИТ) 636
  • МГУТУ 122
  • МТУСИ 179
  • ХАИ 656
  • ТПУ 454
  • НИУ МЭИ 641
  • НМСУ «Горный» 1701
  • ХПИ 1534
  • НТУУ «КПИ» 212
  • НУК им. Макарова 542
  • НВ 777
  • НГАВТ 362
  • НГАУ 411
  • НГАСУ 817
  • НГМУ 665
  • НГПУ 214
  • НГТУ 4610
  • НГУ 1992
  • НГУЭУ 499
  • НИИ 201
  • ОмГТУ 301
  • ОмГУПС 230
  • СПбПК №4 115
  • ПГУПС 2489
  • ПГПУ им. Короленко 296
  • ПНТУ им. Кондратюка 119
  • РАНХиГС 186
  • РОАТ МИИТ 608
  • РТА 243
  • РГГМУ 118
  • РГПУ им. Герцена 124
  • РГППУ 142
  • РГСУ 162
  • «МАТИ» — РГТУ 121
  • РГУНиГ 260
  • РЭУ им. Плеханова 122
  • РГАТУ им. Соловьёва 219
  • РязГМУ 125
  • РГРТУ 666
  • СамГТУ 130
  • СПбГАСУ 318
  • ИНЖЭКОН 328
  • СПбГИПСР 136
  • СПбГЛТУ им. Кирова 227
  • СПбГМТУ 143
  • СПбГПМУ 147
  • СПбГПУ 1598
  • СПбГТИ (ТУ) 292
  • СПбГТУРП 235
  • СПбГУ 582
  • ГУАП 524
  • СПбГУНиПТ 291
  • СПбГУПТД 438
  • СПбГУСЭ 226
  • СПбГУТ 193
  • СПГУТД 151
  • СПбГУЭФ 145
  • СПбГЭТУ «ЛЭТИ» 380
  • ПИМаш 247
  • НИУ ИТМО 531
  • СГТУ им. Гагарина 114
  • СахГУ 278
  • СЗТУ 484
  • СибАГС 249
  • СибГАУ 462
  • СибГИУ 1655
  • СибГТУ 946
  • СГУПС 1513
  • СибГУТИ 2083
  • СибУПК 377
  • СФУ 2423
  • СНАУ 567
  • СумГУ 768
  • ТРТУ 149
  • ТОГУ 551
  • ТГЭУ 325
  • ТГУ (Томск) 276
  • ТГПУ 181
  • ТулГУ 553
  • УкрГАЖТ 234
  • УлГТУ 536
  • УИПКПРО 123
  • УрГПУ 195
  • УГТУ-УПИ 758
  • УГНТУ 570
  • УГТУ 134
  • ХГАЭП 138
  • ХГАФК 110
  • ХНАГХ 407
  • ХНУВД 512
  • ХНУ им. Каразина 305
  • ХНУРЭ 324
  • ХНЭУ 495
  • ЦПУ 157
  • ЧитГУ 220
  • ЮУрГУ 306

Полный список ВУЗов

Чтобы распечатать файл, скачайте его (в формате Word).

источник

Красные кровяные тельца (или эритроциты) — наиболее многочисленные клетки крови. Особое устройство мембраны позволяет им захватывать молекулы кислорода в капиллярах легких и транспортировать его к тканям и органам. Однако при определенных патологиях структура оболочки эритроцитов становится менее устойчивой и легко разрушается. Такие изменения приводят к значительному уменьшению количества красных телец в крови и последующему нарушению кислородного обмена в тканях организма.

Способность мембран красных клеток крови противостоять разрушению под воздействием неблагоприятных факторов получила название резистентность. Особое значение при диагностике заболеваний имеет осмотическая резистентность (ОРЭ) — сохранение устойчивости оболочки клетки в условиях изменения концентрации растворенных солей в окружающей ее среде.

Клетки крови способны нормально функционировать в изотоническом растворе (содержание ионов NaCl не превышает 0,85%). Такая концентрация NaCl соответствует количеству ионов соли в сыворотке крови. Те растворы, которые содержат большее количество солей, называются гипертоническими, а меньшее — гипотонические. Мембраны клеток, помещенных в такие растворы, быстро разрушаются.

Эритроциты здорового человека способны выдерживать изменения осмотического давления, то есть обладать прочной оболочкой. Для определения стойкости мембран клеток крови используют следующую методику:

  1. В пробирки помещается раствор NaCl c разной степенью концентрации (начиная от самой большой — 0,7%, до наименьшей — 0,22%);
  2. В каждую пробирку добавляется небольшое количество крови (не более 0,02 мл);
  3. В течение следующего часа пробирки держат при температуре в 22-23°C;
  4. Полученные растворы центрифугируют и по цвету содержимого высчитывают примерное время начала разрушения клеток крови и момент их полного гемолиза;

Чуть розовый раствор свидетельствует о том, что эритроциты только начали разрушаться, тогда как ярко-красный цвет — знак того, что произошел полный распад клеток.

При помощи этого анализа определяют минимальную и максимальную осмотическую резистентность кровяных телец. Максимальная соответствует тому значению содержания NaCl, при котором происходит полное разрушение клеток крови. Минимальная же определяется тем количеством, при котором клетки разрушаются меньше всего.

Расчет значений осмотической резистентности позволит определить причину нехватки эритроцитов в крови пациента. Для проведения анализа кровь берется из вены и сразу же помещается в пробирку с антикоагулянтом, чтобы избежать ее свертывания. В каких-либо особых приготовлениях перед сдачей анализа нет необходимости — пациент может не менять привычный ему режим питания.

Для взрослого человека нормальными показателями являются следующие значения:

  • минимальная резистентность — не выше 0,48%;
  • максимальная — не ниже 0,32%

Следует помнить, что у маленьких детей показатели устойчивости значительно выше, чем у взрослых пациентов, в то время как у пожилых — немного ниже нормы.

Существует несколько факторов, которые могут повлиять на достоверность данных анализа:

  • недавнее переливание крови;
  • присутствие во взятом образце патогенных микроорганизмов, которые вызывают гемолиз клеток;
  • некоторые заболевания, при которых количество зрелых эритроцитов в крови минимально (тяжелые формы анемии);
  • наконец, человеческий фактор — неосторожное обращение с наполненными пробирками может привезти к преждевременному гемолизу;

Если вышеперечисленные причины отсутствовали, а результат анализа выходит за пределы нормы, то можно говорить о серьезном заболевании, за которым последуют значительные нарушения обмена веществ в организме.

ОРЭ менее 0,33% развивается в следующих ситуациях:

  • значительные кровопотери;
  • при талассемии (наследуемое заболевание, при котором нарушен синтез белков, входящих в состав гемоглобина);
  • при спленэктомии (удалении части селезенки — органа, активно участвующем в процессах кроветворения);
  • при полицитемии (нарушение функций кроветворных клеток костного мозга);

Резистентность более 0,48% связана с такими заболеваниями как:

  • наследственная гемолитическая анемия (передающаяся по наследству патология, при которой организм активно разрушает свои же клетки крови);
  • гемолитическая анемия новорожденных (диагностируется в течение первых дней жизни младенца. Может быть как наследственной, так и приобретенной);
  • отравление солями тяжелых металлов;

Как правило, отклонения от нормальных показателей резистентности сигнализируют о сбоях в работе организма, причем чаще всего диагностируемые патологии носят наследственный характер.

Как правило, причиной снижения резистентности клеток становятся наследственные заболевания. Пациенты, столкнувшиеся с такой проблемой, могут обратиться к генетику, чтобы рассчитать возможность появления такого же заболевания у их детей. В остальных случаях профилактика снижения плотности мембраны клеток крови сводится к ведению здорового образа жизни, отсутствию вредных привычек, созданию наиболее благоприятных условий для процесса кроветворения.

Еще до проведения анализа, пациент может найти у себя признаки снижения устойчивости мембран кровяных телец. Вот основные проявления подобного отклонения:

  • Сонливость;
  • Угнетенное состояние;
  • Значительное снижение массы тела;
  • Анемичность слизистых оболочек;
  • Повышенная температура тела;
  • Отсутствие интереса к еде;

Перечисленные симптомы должны стать серьезным поводом для беспокойства. При их обнаружении следует немедленно записаться на прием к врачу и пройти полное обследование. Чем раньше будет поставлен диагноз, тем быстрее можно будет начать лечение и тем меньший вред будет нанесен организму.

Плотность мембраны зависит не только от возраста клеток, но и от их формы. Сформировавшийся эритроцит приобретает вид двояковогнутого диска, однако также могут встречаться и дегенеративные формы эритроцитов: сферические, звездчатые, полулунные, серповидные и т.д. Для разных заболеваний характерны свои изменения клеток крови. К примеру, при серповидно-клеточной анемии развиваются серповидные эритроциты, талассемия характеризуется появлением овальных клеток, большинство видов анемий проявляют себя появлением сфероцитов — эритроцитов сферической формы.

Нормальную устойчивость мембраны имеют лишь эритроциты в форме двояковогнутого диска. Красные клетки крови другой конфигурации менее жизнеспособны — их резистентность составляет 0,4-0,6% при обычных показателях в 0,32-0,48%. Кроме того, такие клетки, как правило, не способны качественно выполнять свои функции. Из патологических форм чаще всего встречаются овальные эритроциты. Такие клетки можно наблюдать не только при болезнях крови, но и у полностью здоровых людей, поскольку, чем старше становятся эритроциты, тем более округлыми они становятся.

Таким образом, наиболее устойчивыми клетками являются молодые, недавно сформировавшиеся эритроциты, отличающиеся наиболее выраженной дисковидной формой.

Методика расчета осмотической устойчивости нередко применяется при обнаружении гемоглобинопатии и прочих заболеваний крови и отличается эффективностью и простотой. Наиболее часто его применяют для обнаружения гемолитической анемии и онкогематологии (в том числе и у новорожденных).

источник

Осмотическая резистентность эритроцитов — показатель устойчивости эритроцитов к осмотическому давлению. Стойкость ККТ определяется только путем диагностических мероприятий. Превышение или понижение нормы будет свидетельствовать о развитии определенного патологического процесса, а потому показатель следует всегда контролировать.

Осмотическая резистентность эритроцитов имеет свои минимальные и максимальные значения:

  • максимум — воздействие гипотонического раствора натрия хлорида, когда в течение трех часов происходит гемолиз совершенно всех клеток;
  • минимум — воздействие вещества другой концентрации, при которой происходит разрушение только минимально устойчивых клеток.
Читайте также:  Гипохромная микроцитарная анемия средней степени тяжести

Следует отметить, что осмотическая резистентность эритроцитов будет зависеть от их возраста. Самая большая устойчивость у молодых ККТ как у самых плоских.

Определение осмотической резистентности эритроцитов осуществляется следующим образом:

  • используется несколько стеклянных пробирок, в которые заливается раствор натрий хлорида разной концентрации — чаще всего от 0,7 до 22 %;
  • в пробирки с раствором добавляют образцы крови, но только в одинаковом количестве;
  • образцы помещают в условия комнатной температуры на 60 минут;
  • по истечении срока пробирки с образцами центрифугируют;
  • полученный после этого окрас жидкости будет указывать на показатели осмотической стойкости эритроцитов.

Если окрас жидкости розовый, это говорит о минимальной концентрации, а вот ярко-красный цвет будет говорить о максимальной. Норма для сферической резистентности эритроцита составляет 0,32–0,44 процента раствора натрия хлорида.

Норма для взрослого человека следующая:

  • максимальная устойчивость — норма 0,32–0,34 %;
  • минимальная осмотическая резистентность эритроцитов — 0,46–0,48 %.

Если норма не соблюдается, то есть показатели выше или ниже, это может свидетельствовать о развитии определенного патологического процесса в организме. Даже незначительное отклонение от нормы может указывать на довольно тяжелые патологические процессы в организме, поэтому осмотическое давление нужно обязательно контролировать.

Норма показателей может нарушаться вследствие определенных заболеваний как острого, так и хронического типа. Максимальные показатели резистентности могут наблюдаться в следующих случаях:

  • атеросклероз;
  • злокачественные новообразования в желудочно-кишечном тракте;
  • талассемия;
  • полицитемия, но только в некоторых случаях;
  • спленэктомия;
  • гемоглобинопатия;
  • гемоглобиноз;
  • застойная желтуха;
  • врожденные заболевания крови;
  • системные и аутоиммунные патологии.

Минимальная осмотическая резистентность может быть следствием таких патологических процессов:

  • железодефицитная анемия;
  • гемолитическая анемия у новорожденных;
  • отравление тяжелыми металлами;
  • обширная интоксикация организма;
  • наследственная форма гемолитической анемии.

Небольшое отклонение от нормы может быть обусловлено такими заболеваниями:

Предрасполагающие факторы для снижения устойчивости ККТ:

  • выработка шарообразных эритроцитов — генетическое отклонение;
  • завершение жизненного цикла ККТ, что приводит к шарообразной форме;
  • сердечно-сосудистые заболевания.

Определить, что именно привело к такому нарушению, можно только путем диагностических мероприятий. Поводом для начала обследования будет соответствующая клиническая картина.

Клиническая картина будет носить общий характер. Специфических симптомов, которые будут характерны только отклонению от нормы резистентности ККТ, нет.

Может присутствовать симптоматика такого характера:

  • бледность кожных покровов;
  • снижение веса без видимой причины;
  • повышенная утомляемость и нарастающая слабость, что будет больше похоже на синдром хронической усталости;
  • плохой аппетит;
  • сонливость;
  • обострение хронических заболеваний.

При наличии клинической картины нужно обращаться к врачу. Первоначально это врач общей практики, то есть терапевт. Далее обследованием занимаются гематолог и смежные специалисты.

Если диагностически будет установлено, что показатели ниже или выше допустимых, в обязательном порядке нужно проходить лечение, так как большая часть этиологических факторов представляет опасность не только для здоровья, но и для жизни пациента.

Лечение будет полностью основываться на первопричинной патологии. Терапевтические мероприятия могут быть как консервативными, так и радикальными. Прогноз носит исключительно индивидуальный характер.

источник

Вязкость крови

Возникает в результате сил трения между частицами крови, образующихся при ее движении. Величина вязкости зависит от количества и объема эритроцитов, тромбоцитов, лейкоцитов, концентрации белков, органических и неорганических веществ.

Основой определения вязкости крови является то, что скорость продвижения жидкости в одинаковых капиллярах при одной и той же температуре находится в зависимости только от силы внутреннего трения, т. е. от вязкости этой жидкости.

Вязкость дистиллированной воды составляет 1, по отношению к этой величине и определяется вязкость крови. В норме у мужчин вязкость крови – 4,3–5,3, у женщин – 3,9–4,9. Вязкость плазмы у женщин – 1,7–2,0, у мужчин – 1,9–2,3.

Исследование вязкости крови осуществляется при помощи вискозиметра, состоящего из двух одинаковых стеклянных капилляров, на поверхности которых имеются деления от 0 до 10.

Вязкость крови уменьшается при анемии, злокачественном малокровии.

Вязкость повышена при лейкемии, желтухе, пневмонии, полицитемии, нарушении сердечной деятельности.

Скорость оседания эритроцитов (СОЭ)

В пробирке с кровью, лишенной возможности свертываться, эритроциты медленно оседают на дно за счет того, что удельная масса эритроцитов (1096) выше удельной массы плазмы (1027). В норме СОЭ у здорового мужчины за первый час составляет 1–10 мм, у женщины – 2–15 мм, у новорожденного – 0–2 мм. СОЭ зависит от белкового состава плазмы крови: снижается при увеличении содержания в плазме альбумина и повышается при увеличении концентраций фибриногена, гаптоглобина, церулоплазмина и α– и β‑липопротеинов, а также парапротеинов – иммуноглобулинов, образующихся в избытке при некоторых патологических состояниях. СОЭ повышается при значительном уменьшении количества эритроцитов (гематокрита), так как при этом снижается вязкость крови; при увеличении гематокрита СОЭ снижается. При изменении формы эритроцитов (пойкилоцитозе) СОЭ снижается вследствие подавления агрегации эритроцитов. В физиологических условиях СОЭ ускоряется во время менструации, при беременности и после родов. СОЭ не является показателем, специфическим для определенного заболевания, его увеличение отмечается при наличии в организме инфекционно‑воспалительного процесса, системной воспалительной реакции, онкологического процесса. Замедление СОЭ наблюдается при эритремии, вторичных эритроцитозах, при значительном сгущении крови.

Осмотическую резистентность эритроцитов исследуют с использованием гипотонических растворов хлорида натрия. Нормальные величины: у здоровых – начало гемолиза при концентрации хлорида натрия 0,50–0,45 %, полный гемолиз – при концентрации 0,40–0,35 %. Понижение резистентности эритроцитов (появление гемолиза при более высоких, чем в норме, концентрациях хлорида натрия – 0,7–0,75 %) наблюдается при гемолитических несфероцитарных анемиях; наследственном микросфероцитозе. Повышение резистентности эритроцитов наблюдается при талассемии, гемоглобинопатиях.

Минимальная устойчивость эритроцитов выявляется наибольшей концентрацией раствора хлорида натрия, при которой начинают разрушаться менее устойчивые эритроциты, в течение трех часов пребывающие в растворе. Максимальная резистентность – наименьшей концентрацией гипотонического раствора, при которой в течение 3 ч разрушаются все эритроциты. У детей младше 2 лет минимальная устойчивость эритроцитов больше, чем у старших. У пожилых людей отмечаются цифры чуть ниже нормы (субнормальные).

Наибольшая осмотическая резистентность эритроцитов (ниже 0,32 %) наблюдается при большой потере крови, удалении селезенки (спленоэктомия), застойных желтухах, гемоглобинопатиях.

Наименьшая осмотическая устойчивость эритроцитов (выше 0,48 %) возможна при семейной гемолитической анемии, гемолитической анемии у новорожденных, свинцовых отравлениях. Небольшие изменения показателей могут иметь место при бронхопневмониях, токсикозах, малярии, туберкулезе, лимфогранулематозе, лейкемии, циррозе печени. Иногда регистрируются случаи снижения минимальной и увеличение максимальной резистентности (расширение границ осмотической устойчивости). Такое может быть в острой стадии пернициозной анемии и в начале гемолитического криза.

Для определения границ осмотической резистентности эритроцитов используют раствор натрия хлорида в уменьшающейся концентрации, которые затем смешивают с кровью. Концентрация того раствора, где начинается гемолиз (разрушение) эритроцитов (раствор окрашивается в розовый цвет над осевшими на дно эритроцитами), – это верхняя граница устойчивости. Нижняя граница резистентности эритроцитов – это та концентрация хлорида натрия, в которой разрушаются все эритроциты и раствор становится прозрачным.

Существует еще один метод определения осмотической резистентности эритроцитов – фотоколориметрический (с помощью специального аппарата – фотоколориметра).

Дата добавления: 2014-11-20 ; Просмотров: 995 ; Нарушение авторских прав? ;

Нам важно ваше мнение! Был ли полезен опубликованный материал? Да | Нет

источник

Нормальная максимальная осмотическая резистентность эритроцитов составляет 0,34— 0,32 %, а минимальная — 0,48—0,46 %.

Под осмотической резистентностью эритроцитов понимается их устойчивость по от­ношению к гипотоническим растворам натрия хлорида. Минимальная резистентность

эритроцитов определяется максимальной концентрацией гипотонического раствора натрия хлорида (в серии растворов с постепенно уменьшающейся концентрацией), при которой начинается гемолиз наименее устойчивых эритроцитов, находящихся в растворе в течение 3 ч; максимальная — минимальной концентрацией гипотонического раствора натрия хло­рида, вызывающего в течение 3 ч гемолиз всех эритроцитов крови, помещенных в этот раствор.

Максимальная осмотическая резистентность ниже 0,32 % возможна после больших кро-вопотерь и спленэктомии, при гемоглобинозе С, застойных желтухах, а также в некоторых случаях полицитемии. Повышение осмотической резистентности эритроцитов ниже 0,32 % характерно для талассемии и гемоглобинопатии.

Минимальная осмотическая резистентность выше 0,48 % наблюдается при семейной ге­молитической анемии, гемолитической анемии новорожденных и отравлении свинцом. Можно обнаружить небольшие изменения и при токсикозах, бронхопневмониях, туберкуле­зе, малярии, лейкемии, миелосклерозах, лимфогранулематозе, циррозе печени. Случаи рас­ширения границ осмотической резистентности (одновременное понижение минимальной и повышение максимальной резистентности) наблюдаются в начале острого гемолитического криза и в остром периоде пернициозной анемии.

Кислотная резистентность эритроцитов (проба Хема)

В норме проба Хема отрицательная.

Кислотную резистентность определяют на основании различной кислотоустойчивости эритроцитов по отношению к НС1.

При анемии Маркиафавы и некоторых других гемолитических анемиях в подкисленной пробирке по сравнению с контролем обнаруживают ясный гемолиз.

В норме проба на серповидность эритроцитов отрицательная.

Пробу применяют для диагностики гемоглобинопатии. Гемоглобин S при понижении парциального давления кислорода кристаллизуется в форме тактоидов и придает эритроцитам форму серпа. Среди гемоглобинопатии чаще всего встречается серповидно-клеточная анемия, поэтому выявление эритроцитов в виде серпа позволяет установить этот вид анемии.

Эритроцитометрия — измерение диаметра эритроцитов. В процентном отношении диа­метры эритроцитов у здоровых людей распределяются следующим образом: 5 мкм — 0,4 % всех эритроцитов; 6 мкм — 4 %; 7 мкм — 39 %; 8 мкм — 54 %; 9 мкм — 2,5 %. Графическое изображение соотношения содержания в крови эритроцитов с различными диаметрами на­зывают эритроцитометрической кривой Прайс-Джонса, где по оси абсцисс откладывают ве­личину диаметра эритроцитов (мкм), а по оси ординат — проценты эритроцитов соответст­вующей величины. В норме эритроцитометрическая кривая имеет правильную, с довольно узким основанием, почти симметричную форму (рис. 1.1).

Результаты эритроцитометрии важны для уточнения характера анемии. При железоде-фицитной анемии, как правило, возможны микроцитоз эритроцитов до 30—50 % всех эрит­роцитов и соответственно сдвиг эритроцитометрической кривой влево. Увеличение процен­та микроцитов наблюдается также при наследственном микросфероцитозе, талассемии, свинцовом отравлении. При микроцитозе и сфероцитозе эритроцитометрическая кривая растянута и неправильна, сдвинута влево, в сторону меньших диаметров.

Увеличение числа макроцитов является признаком макроцитарной анемии, наблюдаю­щейся при В,2-дефицитных и фолиеводефицитных состояниях, при которых их содержание может достигать 50 % и более, при этом в небольшом числе (1—3 %) находят и мегалоциты (эритроциты с диаметром 12 мкм и более). При этих формах анемии эритроцитометрическая кривая имеет неправильную пологую форму с широким основанием и сдвинута вправо, т.е. в сторону больших диаметров. Макроцитоз эритроцитов может наблюдаться независимо от анемии при алкоголизме, диффузных поражениях печени.

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 Рис. 1.1. Эритроцитометрическая кривая Прайс-Джонса в норме.

Гистограмма распределения эритроцитов по объему, получаемая с помощью современ­ных гематологических анализаторов, по сравнению с такой же по диаметру (кривая Прайс-Джонса) имеет ряд особенностей [Титов В.Н., Наумова И.Н., 1995]. Коэффициент вариации в 3 раза выше при определении объема, чем при определении диаметра. Если кривая распре­деления диаметров эритроцитов симметрична, то распределение клеток по объему будет иметь сдвиг вправо, пропорционально коэффициенту вариации. Если кривая распределения диаметров полимодальна (имеет несколько пиков), то гистограмма распределения эритроци­тов по объему может оказаться унимодальной (одновариантной), что является недостатком автоматизированного метода.

источник

Искусственные гипотермические состояния широко используются в клинической практике. Наиболее часто гипотермию применяют для защиты мозга и сердца от последствий ишемии и инсульта [11]. В этом плане наиболее эффективной оказалась умеренная (30-34ºС) гипотермия. Наши исследования показали, что у крыс кратковременная умеренная гипотермия (30ºС) без анестезии (аналог непреднамеренной гипотермии) способствует развитию холодового стресса и активации свободнорадикальных процессов в крови [5]. В условиях in vivo циркулирующие эритроциты постоянно испытывают влияние активных форм кислорода (АФК), образующихся как в самой клетке, так и в плазме крови [10]. Внутри эритроцитов аутоокисление гемоглобина в метгемоглобин приводит к образованию супероксидного анион-радикала. Источниками внеклеточных АФК служат гранулоциты, макрофаги, другие метаболически активные клетки крови, клетки эндотелия сосудов, которые образуют пероксид водорода и супероксид анион-радикал. Окислительные модификации белков и липидов мембраны могут привести к существенному изменению структурно-функциональных свойств эритроцитов.

Недавно показано [2], что независимо от глубины (ректальную температуру снижали до 32,5°С, 27,5°С и 16,5°С) и способа достижения гипотермии (краниоцеребральная, общая и общая в условиях гипоксии-гиперкапнии) у крыс наблюдается повышение осмотической хрупкости эритроцитов и усиливается их гемолиз. В то же время неизвестно, как изменяется осмотическая стойкость эритроцитов от длительности умеренной гипотермии. Данные научной литературы свидетельствуют о том, что степень осмотической резистентности эритроцитов зависит от концентрации тиоловых групп в белках мембран, особенно, белке полосы 3 [15]. Целью данной работы явилось изучение зависимости осмотической резистентности эритроцитов крыс и концентрации SH-групп белков их мембраны от длительности умеренной гипотермии.

Методы исследования

Опыты проведены на половозрелых лабораторных белых крысах-самцах массой 180-200 г. Для снижения температуры тела крыс помещали в пеналы из плексигласа, в рубашке которых циркулировала холодная вода. Температуру тела крыс снижали в течение 30 мин. до 30°С (кратковременная умеренная гипотермия), а в следующих сериях экспериментов эту температуру тела поддерживали в течение 90 и 180 мин. (пролонгированная умеренная гипотермия). После декапитации животного собирали кровь в пробирку с гепарином (50 ед/мл). Эритроциты осаждали центрифугированием при 2000 об/мин в течение 10 мин., а затем трижды промывали физиологическим раствором при 4°С. Отмытые эритроциты гемолизировали в 10 мМ трис-HCl буфере рН 7,4, содержащем 1,5 мМ ЭДТА [1]. Тени эритроцитов осаждали при 20000 g в течение 20 мин при 4°С, а затем пятикратно отмывали 10 мМ трис-HCl буфером рН 8,2. Белые тени эритроцитов хранили при -70°С до использования.

Читайте также:  Апластическая анемия средней тяжести история болезни

Белок полосы 3 из теней эритроцитов экстрагировали 9 объемами 0,1 моль/л NaOH в течение 30 мин при 4°С [15]. Нерастворимую фракцию, содержащую белок полосы 3, собирали путем центрифугирования при 56000g в течение 30 мин при 4°С.

Содержание SH-групп в общих белках мембран эритроцитов и в белке полосы 3 измеряли колориметрическим методом как описано [8]. К 1,5 мл буфера рН 8,0 (0,08 моль/л фосфата натрия, 0,5 мг/мл Na2-ЭДТА и 2% додецилсульфата натрия) добавляли 0,2 мл суспензии мембран, содержащей 120 мкг белка. После перемешивания добавляли 0,1 мл 5,5′-дитио-бис (2-нитробензойной кислоты) (DTNB; 20 мг в 10 мл 0,1 моль/л натрий-фосфатного буфера рН 8,0). Через 15 мин измеряли поглощение при 412 нм, используя эквивалентную концентрацию белка в качестве контроля. Концентрацию SH-групп рассчитывали, используя молярный коэффициент поглощения, равный 13600 (моль/л)-1 см-1. Белок в мембранах определяли методом Лоури.

Осмотическую резистентность эритроцитов определяли по устойчивости клеток к гипотоническим растворам натрия хлорида. 25 мкл эритроцитов добавляли в серии пробирок, содержащих 2,5 мл растворов с различными концентрациями NaCl (от нуля до 0,9 г/100 мл в 5 ммоль/л фосфатного буфера, рН 7,4) с шагом 0,05 г/100 мл. Пробы инкубировали при 37°C в течение 30 минут. Гемолиз останавливали путем добавления равного объема растворов соответствующих концентраций хлорида натрия, необходимых для восстановления изотоничности. Пробы центрифугировали при 3000 g в течение 10 минут. Оптическую плотность супернатанта определяли при 540 нм (максимум поглощения гемоглобина) против дистиллированной воды при толщине слоя раствора 1 см, используя спектрофотометр СФ-46. Процент гемолиза эритроцитов (X) рассчитывали относительно первой пробы, где отсутствовал NaCl (100% гемолиз) по формуле:

где Ео – экстинкция исследуемой пробы, Еmax – экстинкция, соответствующая 100% гемолизу, X – процент гемолиза.

Для количественной оценки осмотической резистентности эритроцитов использовали величину осмотичности, соответствующую гемолизу 50% клеток (С50), – центр распределения эритроцитов по осмотической резистентности.

Данные в таблице приведены в виде среднее ± ошибка среднего. Достоверность различий определяли с помощью t-критерия Стьюдента.

Результаты и их обсуждение

Результаты наших исследований показали, что при гипотермии осмотическая резистентность эритроцитов изменяется. При этом степень изменений зависела от длительности гипотермии. При кратковременной гипотермии осмотическая хрупкость эритроцитов возрастает (рисунок). При этом наблюдается не только сдвиг эритрограммы вправо, но даже в изотонических условиях происходит 10% гемолиз эритроцитов. Наибольшее и достоверное снижение осмотической резистентности эритроцитов происходит через 90 мин гипотермии. Об этом свидетельствует не только правый сдвиг кривой гемолиза на эритрограмме, но и достоверное повышение значения осмотичности, соответствующее лизису 50% клеток С50 (табл. 1). Как видно (рисунок, табл. 1), через 180 мин гипотермии осмотическая резистентность эритроцитов повышается до уровня контроля.

Осмотическая резистентность эритроцитов крыс при гипотермии

Величина осмотичности, соответствующая гемолизу 50% клеток (С50) при гипотермии (M±m; n = 8)

источник

Анализ на осмотическую резистентность эритроцитов практически никогда не назначается врачом — терапевтом, кардиологом, гастроэнтерологом. А вот врач-гематолог, который занимается диагностикой и лечением заболеваний крови, выписывает Пациенту направление на этот анализ довольно часто. Что это за исследование? Для чего оно проводится, и какие значения определяются у здорового человека?

Чтобы выяснить это, следует вспомнить, что такое эритроциты, что такое резистентность, и какое отношение она имеет к осмосу. Прежде всего, следует заменить красивое слово «резистентность» его синонимом: устойчивость. Поэтому речь пойдет о феномене осмотической устойчивости эритроцитов.

Известно, что эритроциты, или красные кровяные тельца — это главные клетки нашей крови, которые выполняют функцию обеспечения тканевого дыхания. Эритроциты переносят из лёгких кислород в органы и ткани, и забирают из них отработанный углекислый газ, который вновь несут в лёгкие для второй фазы газообмена. Эритроциты никогда не отдыхают. Они ежесекундно производятся в огромных количествах в красном костном мозге, и сразу же включаются в работу. Они постоянно находятся в кровотоке, из крупных сосудов они постепенно перемещаются во всё более мелкие, затем попадают в капилляры. Капилляры настолько узкие, что эритроциты с трудом через них протискиваются.

Для того, чтобы выполнить свою функцию наилучшим образом, эритроциты лишены всех внутренних структур, которые могут помешать размещению в них молекул гемоглобина. Для этого из эритроцитов удаляются ядра, и такие молодые красные кровяные тельца, в которых ещё остались следы ядерных структур, называются ретикулоцитами. Обычно ретикулоциты не попадают в кровоток, или имеются в нём в незначительном количестве. Для того чтобы увеличить площадь эритроцита, и, следовательно, площадь газообмена, эти клетки напоминают по форме двояковогнутые диски. Это очень мудрый ход природы. Если бы они были выпуклыми, они бы при той же площади занимали больший объём, и не могли бы проходить через узкое пространство капилляров.

Каждая эритроцит живет примерно 120 дней, или четыре месяца, и затем разрушается в селезенке. Это значит, что в течение 4 месяцев полностью обновляется весь объем крови, который для взрослого человека составляет более 5 л. Говоря иными словами, ежедневно обновляется около 40 миллилитров крови, в расчёте на красные кровяные тельца. Каждый час красный костный мозг производит около 2 мл крови. А это значит, что каждую секунду красный костный мозг выпускает более 2 миллионов красных кровяных телец, и столько же их разрушается в органе РЭС, или ретикулоэндотелиальной системы. Главным органом РЭС является селезенка.

Как видно из вышеприведенных фактов, на эритроциты постоянно приходится большая нагрузка. И главным структурным компонентом этих клеток, который позволяет выдерживать все нагрузки, является мембрана эритроцитов. Но мембрана испытывает не только физические воздействия в кровотоке, трение о стенки кровеносных сосудов и так далее. Мембрана очень четко реагирует на изменение концентрации поваренной соли, или хлорида натрия в плазме крови.

Известно, что среди всех растворов, которые вводятся внутривенно во всех больницах мира, первое место по объемам занимает стерильный раствор хлорида натрия, который называется изотоническим. Его концентрация — 0,9%, или, точнее — 0,85%. Понятие «изотонический» означает, что раствор этой крепости имеет точно такую же солёность, как и плазма крови, внутренняя среда нашего организма. Для сравнения, обычная морская вода значительно солонее крови: в ней содержится вчетверо больше соли (3,47%).

Именно для такой концентрации поваренной соли и «рассчитана» устойчивость мембран всех клеточных структур, в том числе — и эритроцитов. Но что будет, если с целью эксперимента красные кровяные тельца лишить этой комфортной, физиологической солености и начать ее изменять? Что будет, если помещать красные кровяные тельца в раствор с уменьшающейся концентрацией соли, или, наоборот, с увеличивающейся? Это и будет проверкой на осмотическую стойкость, или резистентность эритроцитов.

Представим, что у нас есть сосуд, разделённый пополам особой плёнкой, который является проницаемой. Если в обеих половинах сосуда находится раствор соли одной и той же концентрации, то ничего происходить не будет, точно так же, как и при одинаковом уровне воды в сообщающихся сосудах: это состояние устойчивого осмотического равновесия. Равенство концентраций вызывает состояние осмотического покоя.

А теперь представим себе, что в одну половину сосуда налита дистиллированная вода без всяких примесей: абсолютно пресная и несоленая. А во второй половине сосуда — концентрированный раствор поваренной соли. Теперь в действие сам собой приходит осмотический насос. Поскольку мембрана является проницаемой, то природа стремится выровнять эти концентрации. А это значит, что молекулы воды устремятся через мембрану из пресной части в соленую. Этот процесс будет происходить до тех пор, пока концентрации не станут одинаковыми по обе стороны мембраны.

Энергия осмоса может использоваться, и уже используется в практических целях. Существует единственная в мире осмотическая электростанция в Норвегии, которая черпает энергию за счёт разной концентрации соли в морской и пресной воде. В результате развивается избыточное давление, который вращает турбину и вырабатывает электроэнергию. Пока мощность этой осмотической электростанции незначительна, и вырабатывает она не более 4 кВт-часов, но зато это непрерывный, возобновляемый источник практически неисчерпаемой энергии, и при этом электростанция не загрязняет окружающую среду.

Примерно такой же процесс происходит во время хранения банки с солёными помидорами. Все знают, что в банку хозяйка складывает помидоры гладкие, с ровной и тугой кожицей. А вот через несколько месяцев, после того как помидоры подают к новогоднему столу, их кожица будет сморщенной, зато рассол приобретает приятный вкус и аромат. Почему это произошло? Просто потому, что кожица помидора — это и есть та самая проницаемая мембрана. Помидоры потому и сморщились, что из них более пресный помидорный сок вышел в рассол и насытил его. А теперь представим, что вместо помидоров — эритроциты.

Вернемся к эритроцитам. Что будет, если взять кровь в пробирке и долить в нее дистиллированной воды? Тогда произойдет обратный процесс. Внутри эритроцитов такая же среда, как в организме, 0,85% хлорида натрия. Снаружи, в дистиллированной воде — 0%. Поэтому дистиллированная вода очень быстро поступает внутрь эритроцитов, чтобы выровнять концентрацию внутри и снаружи.

Клетки постепенно раздуваются, поглощая воду, становятся шарообразными, и, наконец, лопаются. Происходит так называемый гемолиз, и кровь становится прозрачной. Эритроцитов там уже нет. Все их мембраны разрушены, и пигмент гемоглобин растворен в воде. Такая кровь называется «лаковой», так как очень напоминает красноватый лак.

Если поместить эритроциты в гипертонический раствор, то он, напротив, будет высасывать из них всю воду, и они, в конце концов, сморщатся, как те самые помидоры. Все мы знаем, что гипертонические повязки с раствором крепкой поваренной соли, будучи положены на гнойные раны, способствуют их очищению, поскольку забирают всё раневое отделяемое, а полоскания воспаленных и рыхлых миндалин при ангинах соленой водой уменьшают отек и боль. Вот на таких простых принципах и построен этот анализ.

Осмотическая резистентность эритроцитов — это та предельно низкая концентрация в крови поваренной соли, при которой клетки крови ещё не разрушаются. Если чуть-чуть уменьшить эту концентрацию, то все клетки лопаются, и происходит гемолиз. Если осмотическая резистентность эритроцитов высокая, то тогда гемолиз произойдет, когда концентрация соли в диагностическом растворе будет достаточно низкой: мембраны клеток здоровы и упорно сопротивляются разведению.

Если же резистентность эритроцитов плохая, то уже незначительное уменьшение концентрации поваренной соли в растворе вызовет их разрушение. Отсюда можно сделать простой, но важный вывод. Если клеточная мембрана эритроцитов является дефектной, синтезированной «с браком», то тогда резистентность будет ниже, чем у здоровых клеток крови. А это значит, что этот простой анализ позволяет если не определить, то заподозрить наследственные заболевания крови, например, различные виды гемолитических анемий, талассемии, и других болезни.

Каковы же нормальные значения? Какова норма осмотической резистентности эритроцитов?

Итак, в пробирку с кровью добавляют гепарин, чтобы кровь не свернулась раньше времени, и начинают эксперимент. Взятый образец крови делят на части, и добавляют его в пробирки с заранее известной концентрации хлорида натрия.

Какова максимальная и минимальная резистентость эритроцитов в норме? В норме эритроциты полностью устойчивы в диапазоне от нормы, то есть от 0,85% NaCl, и до 0,5%, или до концентрации 5 г поваренной соли на литр. Уже при достижении 0,5% начинается гемолиз эритроцитов, и он продолжается до разведения 0,3%. После того, как соленость крови разведена до 0,3%, вся кровь полностью становится лаковой. Все клетки разрушены.

Если же у пациента с подозрением на гемолитическую анемию гемолиз начинается при более высоких концентрациях, например, на уровне 0,7%, то это — верный признак некачественных мембран эритроцитов. Этот феномен может быть при болезни Минковского-Шоффара, наследственных гемолитических анемиях, некоторых аутоиммунных заболеваниях.

Таким образом, определение осмотической резистентности эритроцитов — это простой, дешевый и одновременно очень информативный анализ. Если резистентность низкая, то врач — гематолог начинает прицельный поиск наследственных гемоглобинопатий, талассемий, наследственных гемолитических анемий, и других заболеваний.

источник