Меню Рубрики

Диагностика анемии по биохимическим показателям

Анемия – это достаточно распространенное состояние организма, при котором количество кислорода, доставляемого кровью к клеткам органов и систем, не соответствует их потребностям. Возможные причины анемии делятся на три основные группы.

Недостаточное потребление кислорода при его недостатке в атмосферном воздухе или при болезнях дыхательной системы.

Нарушение транспорта поступившего кислорода непосредственно в ткани при патологии крови. Причинами сбоев в доставке может быть недостаток или разрушение эритроцитов, дефицит кровяного железа, заболевания сердечно-сосудистой системы, патология гемоглобина.

Повышенный расход кислорода организмом при обильном наружном или внутреннем кровотечении, интенсивном росте опухолевой ткани, беременности, в подростковом возрасте, при тяжелых общих заболеваниях.

Для выявления причин выявленной анемии проводят тесты на содержание железа и ферритина.

Повышенное количество железа дают гемолитическая анемия, то есть процесс разрушения эритроцитов и вывод их содержимого в цитоплазму, серповидно-клеточная анемия, то есть патология гемоглобина, при которой эритроциты имеют неправильную форму и тоже разрушаются, апластическая анемия (патология костного мозга, эритроциты не образуются, железо не используется), острый лейкоз, избыточное лечение препаратами железа.

Понижение уровня железа свидетельствует о железодефицитной анемии, гипотиреозе, злокачественных раковых опухолях, скрытых желудочно-кишечных и гинекологических кровотечениях.

В составе ферритина железо откладывается на длительное хранение для дальнейшего использования в непредвиденных обстоятельствах. Определение его уровня позволяет врачу судить о достаточности запасов железа в организме.

Повышенное количество ферритина бывает при некоторых заболеваниях печени, отличающихся избытком железа, остром лейкозе, раке крови, любом воспалительном процессе.

Понижение уровня ферритина свидетельствует о дефиците железа.

Общая железосвязывающая способность сыворотки

Данный биохимический показатель характеризует наличие железа в сыворотке крови в форме, пригодной для транспортировки кислорода. Железосвязывающая способность сыворотки повышается при недостатке железа и снижается при его избытке.

Повышение показателя говорит о железодефицитной анемии, поздних сроках беременности.

Понижение свидетельствует об анемии (не железодефицитной), хронических инфекциях, циррозе печени.

Фолиевая кислота в комплексе с витамином В12 нужна организму для реализации процесса деления клеток. Их недостаток ведет к развитию В12-фолиеводефицитной анемии или анемии мегалобластной, при которой предшественники эритроцитов в костном мозге не могут нормально поделиться в процессе созревания, в результате чего в кровь выходят так называемые гигантские клетки вместо нужных организму эритроцитов.

Повышенное количество фолатов дает вегетарианская диета, то есть избыток фолиевой кислоты в пище.

Понижение уровня фолатов свидетельствует о дефиците фолиевой кислоты, недостатке витамина В12, выраженной алкогольной зависимости, несбалансированности питания, нарушении функции всасывания.

С-реактивный белок синтезируется прямо в печени, откуда поступает в плазму крови. Он играет важную роль в состоянии иммунитета. У здоровых людей С-реактивный белок обнаруживается в сыворотке в концентрации до 5 мг/л. Повышение количества белка является общей реакцией организма. Оно происходит еще до появления видимых клинических проявлений заболеваний – через 4–8 часов после начала острой фазы и достигает наивысших значений через сутки-двое. Повышенное содержание его фиксируется при многих заболеваниях: широком круге инфекционных болезней, воспалительных, аутоиммунных и аллергических заболеваниях, инфаркте миокарда, травмах, ожогах, хирургических операциях, злокачественных новообразованиях, отторжении трансплантата.

Чем выше показатели С-реактивного белка, тем тяжелее состояние больного и хуже прогноз. И наоборот, снижение его уровня однозначно говорит врачу об успешно протекающем процессе выздоровления. Если сохраняется высокий уровень, то можно подозревать развитие осложнений. Уровень С-реактивного белка, в отличие от скорости оседания эритроцитов (СОЭ), не зависит от пола, времени суток, количества и морфологии эритроцитов, белкового состава плазмы. Поэтому он очень ценен и показателен.

источник

Анализу крови отводят основную роль в постановке диагноза малокровия. Лабораторные исследования помогают определить тип и характер анемии, её тяжесть. Даже при отсутствии других симптомов, присущих анемии, результат обследования крови покажет отклонение от нормы.

Лабораторные обследования проводят, чтобы выдать точное заключение, выявить тип малокровия, провести адекватную терапию. Назначают анализы:

  • общий (клинический) анализ крови;
  • биохимический анализ.

Результаты лабораторных обследований дают ясное представление об этих основных значениях.

Общий анализ крови для диагностики анемии берут из пальца. Процедуру желательно проводить утром, натощак.

Исследуя данные ОАК, устанавливают следующее:

  • общее количество эритроцитов в крови;
  • соотношение объёма и диаметра эритроцитов, их соответствие норме;
  • число ретикулоцитов (клеток-предшественников);
  • уровень гемоглобина в эритроците (цветовой показатель);
  • соотношение видов лейкоцитов, тромбоцитов;
  • определение гематокритного числа.

Значения этих показателей помогают установить причину понижения гемоглобина в крови.

Биохимическое исследование проводят, если на гемограмме выявлено пониженное значение гемоглобина. С его помощью устанавливают:

  • количественное значение железа в сыворотке;
  • уровень трансферрина;
  • связывающую способность сыворотки;
  • количество ферритина.

Эти данные дают наиболее полную картину характера анемии и особенности её протекания.

Кровь для биохимического исследования берут из вены.

На начальном этапе для определения наличия какой-либо анемии сравнивают основные показатели анализа крови с референсными значениями. Основные значения исследуемых величин представлены в таблице:

Пациенты Гемоглобин, г/л (HB) Эритроциты, млн/мкл (RBC) Цветовой показатель Ретикулоциты, % (RTC)
Мужчины 130 – 160 3,8 – 5,6 0,83 – 1,05 5,1 – 18,0
Женщины 120 – 140 3,7 – 5,3 5,0 – 17,0
Подростки (14-18 лет) 125 – 145 3,7 – 5,2 0,9 – 1,0 4,8 – 18,0
Дети (10-14) 120 – 140 3,8 – 5,0 4,8 – 18,0
Дети (5-10) 110 – 135 3,9 – 5,1 4,8 – 18,0

Это основное красящее вещество, входящее в состав эритроцитов, которое отвечает за перенос кислорода. Пониженная составляющая гемоглобина указывает на наличие малокровия различной этиологии.

На основании показателей количественного отклонения гемоглобина от референсных значений выявляют характер протекания анемии по степени интенсивности:

  • лёгкая – содержание гемоглобина от 110-90 г/л;
  • средняя – от 90-70 г/л;
  • тяжёлая – менее 70 г/л.

Определить характер и возможные причины, вызывающие анемию, помогают и другие показатели.

Красные безъядерные кровяные клетки, которые имеют форму диска. Благодаря двояковыпуклой форме эритроциты могут деформироваться, приспосабливаясь к узким капиллярам. Эритроциты доставляют кислород из лёгких ко всем тканям и забирают углекислоту. Низкий уровень этих клеток характеризует любой тип анемии.

Эти клетки представляют собой недозрелую форму эритроцитов. Выявляются в костном мозге, в некотором количестве содержатся в периферической крови. Увеличение доли ретикулоцитов говорит о разрушении эритроцитов, что указывает на прогрессирование анемии. Расчёт ведётся в % отношении от всех эритроцитов. Значение ретикулоцитов помогает оценить степень тяжести заболевания.

Этот показатель нужен для определения степени насыщения гемоглобином кровяных клеток (эритроцитов). Если он ниже нормы, это может указывать на наличие анемии. По значению ЦП различают:

  • гипохромную анемию (менее 0,8);
  • нормохромную анемию (0,8-1,05);
  • геперхромную анемию (свыше 1,05).

Эти данные помогают выявить тип заболевания. Высокий цветовой показатель указывает на фолиеводефицитную и В12 анемию. Нормальное значение ЦП бывает при острой постгеморрагической анемии. Сниженный показатель свидетельствует о дефиците железа.

Для более точной диагностики видов анемии определяют другие неспецифические показатели анализов крови.

МCV – средний объём эритроцита. Выявленные значения свидетельствуют о наличии таких анемий:

Тип Значение MCV Вид анемии
Нормоцитарная от 80-100 фл Гемолитические
Микроцитарная менее 80 фл Железодефицитные
Макроцитарная более 100 фл Фолиево и В12 дефицитные

MCH – уровень гемоглобина в одном эритроците, в среднем. Это значение отражает синтез гемоглобина в кровяных клетках. Он схож с цветовым показателем. Диапазоны нормы таковы:

  • женщины – от 27-34 нг;
  • мужчины – 27-35 нг;
  • дети (10-18 лет) – 26-34 нг.

Показатели в пределах нормы определяют нормохромный тип, который может встречаться при апластической и гемолитической анемии. Такие значения наблюдаются при большой кровопотере.

Уменьшение объёма (микроцитоз) обусловлено гипохромным типом, встречающимся у железодефицитной анемии. Превышение среднего показателя уровня гемоглобина в эритроците свидетельствует о наличии мегобластной и гипопластической анемии.

MCHC – средняя степень насыщения гемоглобина в одной клетке эритроцита (концентрация). Значение этого показателя может указывать:

  • на дефицит железа, если уровень ниже нормы (меньше 29 г/дл);
  • на микросфероцитарную анемию, если значение повышено (больше 37 г/дл).

Для выявления степени тяжести анемии используют и такой показатель, как гематокрит. Это значение указывает на соотношение объёма плазмы и эритроцитов. Это значение меняется в процентном соотношении. Снижение до 20-15% указывает на тяжёлую степень анемии.

Для более точной диагностики анемии, особенно при подозрении на дефицит железа, часто проводят биохимический анализ крови, который определяет важные характеристики:

Главная роль этого белкового комплекса – хранение и высвобождение железа для клеток. Определяя уровень этого белка, можно косвенно измерить количество железа, которое хранится в организме. Норма содержания ферритина составляет 20 – 250 мкг/л (мужчины), 10 – 120 мкг/л (женщины). Низкие показатели указывают на железодефицитную анемию.

Назначение этого белка – перенос железа в нужное место. Нарушение уровня трансферрина приводит к нехватке элемента. Количество поступающего железа может быть при этом достаточным. Этот показатель выявляет активность сыворотки к связыванию железа. Нормальный уровень белка – 2,0-4,0 г/л. Повышение количества может указывать на железодефицитное малокровие. Сниженный уровень характерен при апластической и гипопластической анемии.

Для исследования на трансферрин необходимо специальное оборудование и определённые тесты, которые не всегда доступны.

В определённых случаях выявляют железосвязывающую способность сыворотки, которая показывает способность крови связывать железо. При диагностике анемии определяют латентное значение железосвязывающего показателя. Норма – 20-63 мкмоль/л.

После проведения общего анализа и выявления скорости обмена железа могут назначать другие обследования:

  • анализы на маркеры воспаления, если выявлены симптомы аутоиммунных или ревматических заболеваний;
  • установление уровня содержания фолитов и витамина В12.

Проводимые виды исследования помогают выявить этиологию наиболее распространённых типов малокровия.

В ряде случаев могут назначаться дополнительные обследования и анализы крови для более точной диагностики анемии:

  • микроскопия мазка крови;
  • УЗИ внутренних органов;
  • костномозговая пункция (миелограмма);
  • обследование кишечника и желудка (эндоскопия);
  • анализ мочи;
  • электрокардиограмма.

Эти методы диагностики применяют, когда трудно установить точное происхождение анемии.

Для установления конкретного вида заболевания предполагается выявление характерных показателей:

  • количество фолиевой кислоты, которая находится в эритроцитах: проводят, если есть показания, биопсию костного мозга (подозрение на фолиеводефицитную анемию);
  • количественное значение витамина В12: если не определяется уровень витамина, назначают аспирационную биопсию (подозрение на В12-дефицитную анемию);
  • показатель уровня наличия билирубина в моче и сыворотке: выявляют стойкость эритроцитов, проводят пробу Кумбса (наличие гемолитической анемии).

Если есть подозрение на гипопластическое малокровие, которое характерно сбоем кроветворения костного мозга, определяют процесс и степень разрушения эритроцитов. Проводят исследование на наличие билирубина в кале и моче. Также назначают УЗИ печени и селезёнки для определения их размера.

При определении анемии, вызванной заболеваниями хронического характера, наряду с определением стандартных лабораторных показателей, проводят определение содержания ферритина вместе с выявлением уровня С-реактивного белка. Этот элемент указывает на стадию воспаления.

Проходить лабораторное обследование при подозрении на анемию необходимо. Данные анализов крови помогут установить точный диагноз, определить тип и стадию заболевания. Это даст возможность подобрать необходимое лечение, которое будет эффективным.

источник

Оценка изменения показателей периферической крови при первичной диагностике больных анемией В12. Исследование иммунологического и морфологического методов при постановке диагноза. Характеристика некоторых биохимических показателей сыворотки крови.

Студенты, аспиранты, молодые ученые, использующие базу знаний в своей учебе и работе, будут вам очень благодарны.

Размещено на http://www.allbest.ru/

Размещено на http://www.allbest.ru/

Министерство образования и науки Российской Федерации

Федеральное государственное бюджетное образовательное

учреждение высшего профессионального образования

КУБАНСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ УНИВЕРСИТЕТ

Кафедра биохимии и физиологии

Значимость лабораторных показателей при диагностике анемии В12

Специальность 020201 Биология

Нормоконтролер, канд. биол. наук, доц.

Дипломная работа выполнена на 54 страницах, включает 3 таблицы. При написании работы было использовано 35 литературных источников.

Ключевые слова: АНЕМИЯ В12, ЦИАНКОБАЛАМИН, МЕГАЛОБЛАСТИЧЕСКИЙ ТИП КРОВЕТВОРЕНИЯ, ГЕМОГЛОБИН, НЕПРЯМОЙ БИЛИРУБИН, ЛАКТАТДЕГИДРОГЕНАЗА, АЛАНИНААМИНОТРАНСФЕРАЗА, АСПАРТАТАМИНОТРАНСФЕРАЗА, ГЕМАТОКРИТ, СРЕДНИЙ ОБЪЕМ ЭРИТРОЦИТА, СРЕДНИЙ ДИАМЕТР ЭРИТРОЦИТА.

Работа выполнена на базе клинико-диагностической лаборатории Онкологического краевого диспансера города Краснодара. Исследование проводилось с 05.07.10 по 10.06.11г.

Целью работы было выявление изменений иммунологических, гематологических, биохимических показателей при диагностике анемии В12 и сравнительное исследование иммунологического и морфологического методов диагностики данного заболевания.

В ходе поставленной цели решены следующие задачи:

1) В ходе первичной диагностике больных анемией В12 провести оценку изменения показателей периферической крови.

2) Осуществить сравнительное исследование иммунологического и морфологического методов при постановке диагноза анемии В12.

3) Произвести оценку изменения биохимических показателей в сыворотке крови и выявить наиболее диагностические ценные.

Объектом исследования служила кровь больных анемией В12 и практически здоровых людей.

Поведено сравнительное исследование постановки диагноза анемии В12 при помощи исследования мазков стернальной пункции и определения витамина В12 в сыворотки крови.

Первичное выявление больных с подозрением диагноза анемии В12 проводилось путем определения изменений показателей общего анализа крови. Установлены наиболее значимые гематологические показатели периферической крови: количество эритроцитов, гемоглобин, MCV, MCH, гематокрит, с регистрацией морфологических изменений эритроцитов и нейтрофилов по мазкам периферической крови при данном заболевании.

Читайте также:  Что есть при анемии пожилым людям

Прослежено изменение таких биохимических показателей как: билирубин общий, прямой и непрямой, витамин В12, железо, лактатдегидрогеназа, аспартатаминотрансфераза, аланинаминотрансфераза, щелочная фосфатаза, мочевина, креатинин. Установлены наиболее значимые при данном заболевании биохимические тесты: определение содержание билирубина, железа, ЛДГ.

1.2 Клинические проявления

1.2.1Нарушения со стороны пищеварительного тракта

1.2.2 Нарушения со стороны нервной системы

1.2.3 Нарушения со стороны кроветворной системы

1.3Характеристика некоторых биохимических показателей сыворотки крови при анемии В12

2. Материалы и методы исследования

2.2.1Определение количества эритроцитов, лейкоцитов, тромбоцитов методом DC детекции

2.2.2 Определение гематокрита

2.2.3 Определение среднего содержания гемоглобина в эритроците

2.2.4 Определение среднего объема эритроцита

2.2.5 Определение концентрации гемоглобина

2.2.7 Определение количества витамина В12

2.2.8 Определение количества общего билирубина

2.2.9 Определение количества прямого билирубина

2.2.10 Определение активности аланинаминотрансфераз

2.2.11 Определение активности аспартатаминотрансферазы

2.2.12 Определение активности лактатдегидрогеназы

2.2.13 Определение количества мочевины

2.2.14 Определение количества креатинина

2.2.15 Определение количества железа

2.2.16 Определение активности щелочной фосфатазы

2.2.17 Исследование костного мозга

2.3Методы математической обработки результатов

3. Изменение и значимость гематологических показателей при анемииВ12

3.1Изменение количества эритроцитов и гематокрита крови при анемии В12

3.2 Изменение гемоглобина, среднего содержания гемоглобина в эритроците, среднего объема эритроцита, при анемии В12

3.3 Изменение количества лейкоцитов, тромбоцитов при анемии В12

3.4 Изменение показателя скорости оседания эритроцитов при анемии В12

4. Изменения при мегалобластической анемии в красном ростке костного мозга в сопоставлении с изменениями концентрации витамина В12 в сыворотке крови

5. Изменение и значимость биохимических показателей при анемии В12

5.1 Изменение концентрации билирубина и железа в сыворотке крови при анемииВ12

5.2 Изменение активности лактатдегидрогеназы в сыворотке крови при анемии В12

5.3 Изменение активности алалнинааминотрансферазы и аспартата-аминотрансферазы сыворотки крови при анемии В12

5.4 Изменение количества мочевины и креатинина в сыворотки крови при анемии В12

5.5 Изменение активности щелочной фосфотазы в сыворотке крови

Список использованных источников

Определения, обозначения и сокращения

ММК — метилмалоновая кислота

MCV- средний объем эритроцитов

Анемия (буквально «без крови») — клинико-лабораторный синдром, характеризующийся снижением уровня гемоглобина, и концентрации эритроцитов в единице объема крови.

Главным патологическим эффектом для всех типов анемий является ограниченная доставка кислорода к тканям [Хиггинс К, 2010].

В данной работе рассмотрена анемия, вызванная дефицитом витамина цианкобаламина. А именно: этиология возникновения, клинические проявления, особое внимание уделено рассмотрению причин изменения функционирования органов кроветворения, прослежены изменения в красном ростке костного мозга с содержанием витамина В12 в сыворотке крови, изменения гематологических показателей крови, биохимических показателей крови, а также методам регистрации этих изменений.

Впервые витамин В12- дефицитные анемии описал Адисон в 1849г., а затем в 1872г. Бирмер, назвавший ее «прогрессирующей пернициозной анемией [Долгов В.В, Луговская С.А, Морозова В, Т, Почтарь М.Е, 2001].

Данное заболевание встречается достаточно часто. Частота пернициозной анемии составляет 110—180 случаев на 100 000 населения.

По другим данным широкомасштабных исследований последних лет до 20% пожилых лиц в США имеют различной степени выраженности дефицит В12. Среди лиц старше 40 лет на 100 тысяч составляет 25 человек в год. Среди лиц старше 60 лет частота достигает 1%. Анемия В12 чаще встречается у лиц пожилого возраста, однако иногда выявляется и в возрасте около 30 лет. Соотношение больных женщин и мужчин постоянно составляет 10:7[Пернициозная анемия].

Анемия В12 связана с нарушением синтеза ДНК и может быть как наследственной, так и приобретенной. Общими признаками этих анемий является наличие в костном мозге мегалобластичнского типа кроветворения, при этом в крови наблюдается дефицит витамина В12-одного из ключевого фермента синтеза ДНК [Демидова А.В.,1996].

Витамин В12 выполняет роль кофактора двух важных внутриклеточных ферментов. Первый из них метионинсинтетаза в цитоплазме и в митохондриях катализирует переход метилтетрагидрофолат в тетрагидрофолат, необходимый для работы ряда ферментов и синтеза ДНК. В ходе этой реакции аминокислота гомоцистеин превращается в метионин. Следовательно дефицит цианкобаламина приводит к повышению содержанию сывороточного гомоцистеина (ГЦ) [Мегалобластическая анемия]. Нарушение первой реакции ведет к неэффективному эритропоэзу в костном мозге, вызванный нарушением синтеза ДНК. В результате нарушения клеточного деления эритробласты увеличиваются в размере, а кроветворение трансформируется в мегалобластическое.

Вторая реакция, в которой участвует витамин В12, не имеет отношения к кроветворению. Она необходима для нормального обмена жирных кислот, входящих в состав миелина. В ходе нее метилмалонил коэнзим А превращается в сукцинил коэнзим А. Результат нарушения второй реакции: токсическое воздействие на нервные клетки в связи с накапливающейся в организме токсичной метилмалоновой кислоты (ММК) [Филатов Л.Б.,2006].

Клиническая картина заболевания складывается из классической триады симптомов поражения системы кроветворения, нервной системы, расстройств желудочно-кишечного тракта Тяжелыми осложнениями является развитие пернициозной комы, возникающей в результате быстрой анемизации ишемии головного мозга [Рубцовенко А.В, 2006].

Таким образом, можно утверждать, что анемия В12 является серьезным заболеванием кровеносной системы. Актуальность исследования анемии В12 не потеряла своего значения в наши дни, о чем и говорит статистика.

Витамин В12 не может синтезироваться в организме человека. Главный его источник — мясо, рыба, молочные продукты, особенно богата им печень животных. Овощи не содержат витамин В12. Минимальная ежедневная потребность составляет 5 мкг, а запасы витамина в организме человека около 5 мг, поэтому истощение запасов цианкобаламина, при отсутствии его поступления, наступает только через 1000 .Здоровая пища обеспечивает потребность в витамине В12 организм человека с избытком [Ловкис З.В., Почицкая И.М., Мельситова И.В., Литвяк В.В.,2008]. Печень — основной орган, в котором содержится витамин В12, для истощения запаса витамина необходимо 3-4года [Заболевания крови. Полный справочник].

Своевременный мониторинг и постановка правильного диагноза больному, способствует проведению своевременной терапии, возводя данное заболевание в ранг успешно поддающихся лечению.

В качестве лечения используют препараты витамин В12 — кобаламин в дозе 200-500 мкг ежедневно до нормализации показателей красной крови, а поддерживающая терапия обеспечивает защиту от рецидива [Витамины,1974].

анемия кровь биохимический сыворотка

Для понимания причин возникновения анемии В12 важным является рассмотрение высокоорганизованной системы расщепления, транспорта и всасывания кобаламина в организме. Условно этот процесс можно разделить на 3 составляющие. А именно процессы, происходящие в желудке, двенадцатиперстной кишке, терминальном отделе подвздошной кишки.

Итак, первым звеном этой цепи является попадание витамина В12, иногда его называют внешним фактором, в желудок в комплексе с белками, которые отщепляются под действием пепсина. Затем свободный В12 связывается с R-протеином (транскобаламин I), образуя В12-R-комплекс. В дальнейшем указанный комплекс переносится в дистальную часть двенадцатиперстной кишки к внутреннему фактору (ВФ) или фактору Кастла — белку, который синтезируется париентальными клетками желудка. После расщепления в двенадцатиперстной кишке комплекса (В12-R) под воздействием панкриотических ферментов, образуется свободный В12. Он в свою очередь связывается с ВФ в щелочной среде, образуя комплекс (ВФ-В12). Комплекс ВФ-В12 трансформирует кобаламин в терминальный отдел подвздошной кишки.

На заключительном этапе в данном отделе подвздошной кишки происходит связывание ВФ-В12 комплекса со специфическими рецепторами на клетках слизистой. Захватившись клеткой, витамин В12 связывается с транскобаламином-II, попадает в циркуляцию и целенаправленно переносится в органы и ткани.

Нарушения в любом из указанных звеньев может стать причиной дефицита витамина В12 в организме. Путем пассивной диффузии без участия ВФ происходит 1-5 % витамина В12[Филатов Л.Б.,2006].

Таким образом, среди экзогенных причин возникновения дефицита витамина В12 может быть:

— снижение поступления витамина В12 в составе пищи (строгое вегетарианство) [Биохимия для врача. Под ред. Бышевский А.Ш. -Екатеринбург.1994. 384 с].

Среди эндогенных причин возникновения:

-нарушение транспорта (отсутствие в цепи передачи в желудочно-кишечном тракте транскобаламина-II);

-нарушение продукции внутреннего фактора

-конкурентный расход витамина В12 гельминтами [Филатов Л.Б.,2006].

Среди причин нарушения продукции внутреннего фактора выделяют:

-атрофический гастрит дна желудка, ожоги или удаление части желудка;

-антитела к париентальным клеткам дна желудка;

-антитела к внутреннему фактору [Биохимия для врача,1994].

При обследовании более чем у 90% больных определяются антитела к париетальным клеткам желудка, относящиеся к классу иммуноглобулинов G, однако они не являются специфичными только для пернициозной анемии. Более показательно выявление антител к ВФ, которые могут быть обнаружены примерно у 60% больных. Не исключается вероятность генетической предрасположенности к развитию пернициозной анемии с наследованием, по всей вероятности, по аутосомно-рецессивному типу [Гусева С.А., Г Вознюк В.П., Дубкова А.Г.,2001].

К вредному гематотропному фактору относятся органические растворители. Среди людей, контактирующих с ними, выявляется значительное процентное возрастание заболевших лиц [Академическая история болезни анемии В12, 2008].

1.2 Клинические проявления

Заболевание развивается постепенно, и часто пациент обращается за медицинской помощью уже при значительном снижении уровня гемоглобина.

Больные предъявляют жалобы на диспепсические явления, нарастающую слабость, повышенную утомляемость, головокружение и другие проявления, связанные с прогрессирующей анемией. У ряда больных теряются вкусовые ощущения, появляется отвращение к мясной и другого вида пище. На различных этапах могут появляться боли и жжение в языке и при осмотре определяется характерный для В12 анемии классический симптом-глоссит [Мегалобластная анемия]. Он выражается в появлении на языке ярко-красных участков воспаления, весьма чувствительных к приему пищи, лекарств. В дальнейшем воспалительные участки стихают и сосочки языка атрофируются. Язык становится гладким и блестящим («лакированный язык») [Кассирский Н.А., Алексеев Г.А.,1970]. Причина такого изменения языка связана с тем, что его эпителий относится к числу быстро пролиферирующих клеток, которые, как и клетки гемопоэза, высокочувствительны к дефициту В12 [Демидова А.В.,1996].

Для внешнего вида больных характерны бледность кожи с лимонно-желтым оттенком, субиктеричность склер, лицо часто одутловатое.

Клиничиская картина болезни складывается из следующей триады:

нарушения со стороны пищеварительного тракта;

нарушения со стороны кроветворной системы;

нарушения со стороны нервной системы [Кассирский Н.А., Алексеев Г.А.,1970].

Каждый признак включает комплекс проявлений и требует отдельного внимания. Рассмотрим их подробнее.

1.2.1 Нарушения со стороны пищеварительного тракта

Гистологическое строение слизистой желудка, полученной путем биопсии, характеризуется истончением железистого слоя и уменьшением самих желез. Большая часть секретирующих клеток или все они погибают и замещаются слизеобразующими клетками [Пернициозная анемия].

Условно различают три степени атрофии слизистой желудка. При первой степени отмечается простая ахлоргидрия.

Ахлоргидрия — отсутствие или понижение содержания соляной кислоты в желудочном соке [Ахлоргидрия].

При второй — исчезновение пепсина. При третьей — полная ахилия, включая отсутствие секреции гастромукопротеина, т.е. внутреннего фактора.

Ахилия — паталогическое состояние при котором в желудочном соке отсутствует соляная кислота и фермент пепсин [Орлов Ф.М.,1985].

При пернициозной анемии наблюдается обычно третья степень атрофии, однако бывают и исключения [Кассирский Н.А., Алексеев Г.А.,1970].

При истинной пернициозной анемии нарушение всасывания витамина В12 обусловлено наличием антител к внутреннему фактору и клеткам слизистой желудка [Назаренко В.И., Кишкун А.А., 2000].

1.2.2 Нарушения со стороны нервной системы

Весьма важны в диагностическом и прогностическом отношении являются изменения со стороны нервной системы.

Однако, между тяжестью неврологических проявлений и мегалобластной анемией могут иметь место значительные расхождения. Так, у 25% больных с дефицитом кобаламина имеют место главным образом неврологические нарушения при нормальных или почти нормальных гематологических показателях [Мегалобластическая анемия]. Причем иногда неврологическая симптоматика может опережать развитие анемии.

Неврологические нарушения при анемии В12 известны под названием фуникулярного миелоза. Наиболее частыми симптомами являются болезненные перестезии (ощущение ползания мурашек, онемение дистальных отделов конечностей), шаткая походка, незначительных повышениях сухожильных рефлексов.

При тяжелейших, редко встречающихся формах, развиваются параличи, полной потерей глубокой чувствительности. Реже наблюдается поражение черепных нервов, главным образом зрительного, слухового и обонятельного, в связи с чем появляются и соответствующие симптомы со стороны органов чувств (потеря обоняния, понижение слуха и зрения). Возможны психические расстройства с появлением бреда, галлюцинаций [Кассирский И.А., Алексеева Г.А.,1970].

Фуникулярный миелоз есть результат дефицита витамина В12. Ко-фермент витамин В12 — дезоксиаденозинкобаламин участвует в реакции превращения: метилмалоновая кислота — сукцинил-коэнзим А. При дефиците витамина В12 содержание кофермента данной реакции уменьшается. Реакция не идет, а значит, происходит накопление метилмалоновой кислоты, токсичной для нервной клетки. Данная реакция необходима для распада и синтеза некоторых жирных кислот, входящих в состав миелина [Филатов Л.Б.,2006].

Таким образом, вследствие процесса демиелинизации, захватывающих головной мозг, задние столбы спинного мозга и периферические нервы, становятся легко объяснимы вышеперечисленные нарушения со стороны нервной системы при отсутствии цианкобаламина.

1.2.3 Нарушение со стороны кроветворной системы

Клинические проявления при анемии В12 со стороны системы кроветворения крайне разнообразны и занимают центральное место в диагностике.

В костном мозге, осуществляется гемопоэз — процесс образования новых клеток крови взамен погибающих и отмирающих. Различают красный костный мозг, с преобладанием кроветворной миелоидной тканью и желтый — с преобладанием жировой ткани. Красный костный мозг сохраняется в плоских костях (ребрах, грудине, костях черепа, и таза), а так же в позвонках и эпифизах трубчатых костей. [Красный костный мозг и его физиологическое значение].

Читайте также:  Какую смесь выбрать при анемии

Все гемопоэтические клетки имеют костномозговое происхождение. В костном мозге образуются клетки трех ростков кроветворения: эритроцитарного, миелоидного, мегакариоцитарного, при этом обеспечение кроветворения происходит строго адекватно запросу благодаря сложной системе его регуляции. Качественное и количественное регуляция обазования клеток крови осуществляется клетками предшественниками гемопоэза. Также существует гуморальные регуляторы кроветворения — поэтины. Фактором, участвующим в регуляции эритропоэза, является эритропоэтин, который регулирует интенсивность пролиферации и направление дифференцировки костномозговых предшественников (эритропоэтин чувствительных клеток), влияя на процесс развития эритроидных клеток (ускоряет построение гемоглобина, способствует ретикулоцитов из костного мозга) [Кишкун А.А.,2010].

При анемии В12. имеет место неэффективный эритропоэз. В костном мозге наблюдается переход к мегалобластическому типу кроветворения, характеризующемуся большим количеством крупных незрелых предшественников эритроцитов (мегалобластов). Характерной чертой мегалобластов является их большие размеры и нежно-сетчатый без колесовидной структуры ядерный хроматин, ранняя гемоглобинезация и отставание вызревания ядра. [Атлас клеток крови и костного мозга.,1998].

Костный мозг повышенно клеточный, красный росток нередко увеличен в 3 раза против нормы, однако выход эритроцитов в периферическое русло снижен, т е имеется «неэффективный эритропоэз», вследствие нарушения синтеза ДНК, накопления клеток в премитотической стадии ( нарушение клеточного деления) и их разрушения до созревания , а так же задержки освобождения ретикулоцитов, снижения продолжительности жизни их и эритоцитов. Отмечено характерное укорочение времени пребывания эритроцитов в крови, с максимальной продолжительностью жизни при рецидиве до 75 дней, в норме эритроцит живет 120-140 дней [Справочник по клиническим лабораторным исследованиям,1975]. Находят типичные мегалобласты, мофологически измененные клетки гранулоцитарного ряда (базофилия и недостаточная грануляция циоплазмы, большой размер, гиперсегментация (сегментоядерных форм) и мегакариоцитов (гиперсигментированность, полиплоидность ядра) [Козловская Л.В, Николаев А.Ю.,1984].

Причиной такого функционального дисбаланса красного костного мозга является недостаток витамина В12 любого происхождения [Кассирский И.А., Алексеев Г.А.,1970].

Дефицит витамина В12 ведет к нарушению и в мегакариоцитарном ростке. Здесь нарушается отшнуровка тромбоцитов, они имеют необычную форму. Функция тромбоцитов при этом как правило не нарушена и кровоточивость бывает редко [Мегалобластная анемия].

В гранулоцитарном ростке также вследствие нехватки витамина В12 наблюдаются изменения: отмечаются гигантские сегментоядерные нейтрофилы и палочкоядерные нейтрофилы, количество сегментов которых может достигать 8-10, в норме количество сегментов 2-5 (клинические лабораторные исследования [Любина А.Я., Ильичева Л.П., Катасонова Т.В.,1984].

В мазке периферической крови отмечается мегалоциты- преобладание в крови эритоцитов с диаметром(> 9,0 мкм), и увеличенным объемом(> 100-110 фл). Этот признак выявляется у новорожденных как физиологическая особенность, а также у взрослых при макроцитарных анемиях, в частности при дефиците витамина В12.Увеличение объема клетки обычно всегда пропорционально увеличению внутриклеточного гемоглобина, то есть концентрация гемоглобина остается нормальной [Атлас клеток крови и костного мозга.,1998].

Обнаруживается анизоцитоз, в частности мегалоцитоз- появление в мазках крови эритоцитов, диаметром 11,0-12,0 мкм, гиперхромных, без просветления в центре, овальной формы, а также пойкилоцитоз- появление эритоцитов в различной степени измененной формой.

Характерными для анемии В12 являются остатки ядерных образований в виде разнообразных фигур, телец Жолли, колец Кебота, часто отмечаемых в картине периферической крови [Долгов В.В, Луговская С.А, Морозова В, Т, Почтаь М.Е, 2001].

Тельца Жолли являются остатками ядерного хроматина. Они имеют округлую форму, достигая 1мкм и более. В одном мегалоците может быть несколько телец Жолли, они красятся в фиолетовый цвет [Атлас клеток крови и костного мозга.,1998].

Кольца Кебота представляют собой остатки ядерной оболочки. Имея вид колечка, они могут приобретать различные формы в результате перекрута кольцевидного образования. Окрашиваются в красный цвет.

Пылинки Вейденрейха являются остатками ядерного вещества, встречаются в тяжелых случаях анемии, главным образом при пернициозной. Пылевидная структура окрашивается в розовый, но иногда и в голубой цвет [Абрамов М.Г.,1985].

Характерно сниженное количество ретикулоцитов, так как именно на данной стадии клетки теряют ядро и превращаются во взрослые эритроциты. В связи с нарушением процесса удаления ядра в мегалобластах, наблюдается сниженной количество ретикулоцитов, как следствие снижения числа эритроцитов на периферии. Характерным признаком является ре ретикулоцитарный криз уже в первые 24-48 часов в ответ на проводимую терапию витамином В12[Справочник по клиническим лабораторным исследованиям,1975].

1.3 Характеристика некоторых биохимических показателей при анемии В12

Биохимические анализы позволяют судить об обменных процессах, химическом составе биологических жидкостей человеческого организма, т.е. они служат для оценки физиологического состояния различных органов и систем, для определения тяжести состояния [Любина А.Я., Ильичева Л.П., Катасонова Т.В.,1984].

Основная часть из 250-300 мг билирубина, образующегося ежедневно у здоровых людей, является продуктом метаболизма гемоглобина (белка эритроцитов) [Хиггинс К.,2010].

Время жизни эритроцитов составляет 120 дней. По окончанию этого срока они разрушаются в клетках ретикулоэндотелиальной системы костного мозга, печени, селезенки и некоторых других органов. Процессу распада подвергается и содержащийся в эритроцитах гемоглобин [Колб В.Г., Камышников В.С.,1984]. Гемоглобин расщепляется на гем и глобин. Около 80% всего гемма организма находится в гемоглобине. Поэтому обмен гема прежде всего отражает состояние обмена гемоглобина [Николаев А.Я.,2001]. Освобождающийся из гемоглобина гемм повторно не используется: он распадается с образованием железа и желчных пигментов.

Первая реакция распада гема приводит к отщеплению железа и образованию биливердина — пигмента зеленого цвета. Почти весь биливердин ферментативным путем восстанавливается в основной и важнейший красно-желтый пигмент желчи билирубин. Этот свободный (несвязанный) билирубин в силу нерастворимости в воде не переходит в мочу и дает непрямую реакцию Ван дер Берга. Следовательно, непрямой билирубин это свободный билирубин. Он соединяется с альбумином и транспортируется в печень, где проходит его конъюгация с глюкороновой кислотой, образуя связанный билирубин. Он хорошо растворим в воде, и легко высвобождается с желчью в кишечник [Николаев А.Я.,2001].

В крови взрослого человека содержится относительно постоянное количество общего билирубина, от 4 до 26 мкмоль/л, в среднем 15 мкмоль/л. Около 75% этого количества приходится на долю непрямого билрубина. Повышение концентрации общего билирубина в организме приводит к желтушным явлениям [Березов Т.Т., Коровкин Б.Ф.,1998]. Важным диагностическим значением при анемии В12 является повышение уровня непрямого билирубина. При усиленном распаде множество гемоглобилизированных мегалобластов концентрация общего билирубина увеличивается за счет резкого увеличения непрямого билирубина. Последний не успевает перерабатываться клетками печени и остается в крови. В связи с этим становится ясным почему у больных появляется желтушная окраска склер и кожи [Клиническая биохимия, 2004].

При анемии В12 может наблюдаться повышение в сыворотке крови общего железа. В норме его содержание колеблется в диапазоне 9,5-12 мкмоль/л с верхним пределом концентрации 27 мкмоль/л у женщин и 29,9 мкмоль/л у мужчин. В организме человека содержится 65-70 % железа в составе гемоглобина эритроцитов. В количественном отношении обмен железа определяется синтезом и распадом гемоглобина эритроцитов [Николаев А.Я.,2001]. В процессе распада множества гемоглобинизированных мегалобластов наблюдается повышенное накопление продуктов их распада. В том числе и железа [Кассирский И.А., Алексеев Г,А .,1970].

ЛДГ широко распространен в организме человека. Наибольшая активность ЛДГ обнаружена в почках, сердечной мышце, скелетной мускулатуре, печени. Содержится не только в сыворотке, но и в значительном количестве в эритроцитах. Существует 5 изоферментных форм ЛДТ, в тканях с преимущественно аэробным обменом веществ наибольшей ЛДГ активностью обладают изоферменты ЛДГ1 и ЛДГ2, а анаэробными — ЛДГ4 и ЛДГ5[Анемия В12.Лактатдегидрогеназа].

Повреждение того или иного органа соответственно изменяет изоферментный спектр сыворотки крови. В норме уровень активности 240-480 МЕ/л. Т.к. при анемии В12 наблюдается активный процесс разрушения эритроцитов с высвобождением продуктов его распада, то в крови обнаруживается повышение активности ЛДГ. Таким образом, повышение ЛДГ является характерным признаком при мегалобластческой анемии [Мегалобластная анемия. Лактатдегидрогеназа]. При этом повышение ЛДГ происходит преимущественно за счет фракций ЛДГ1 и ЛДГ2 [Мегалобластная анемия].

Таким образом, изменение в биохимическом составе крови в совокупности с особенностями морфологии красного ростка костного мозга и периферической крови, гематологической и клинической картиной могут служить основой для постановки диагноза мегалобластной анемии.

2. Материал и методы исследований

Исследование проводилось на базе клинико-диагностической лаборатории Онкологического краевого диспансера города Краснодара. Исследование проводилось с 5.07.10 по 10.06.11.

Всего было обследовано 30 человек заболеванием анемии В12, а также 15 человек без патологии, составивших контрольную группу. Полученные нормальные показатели достоверно не отличались от нормальных показателей, рекомендованных методическими указаниями фирмы производителя реактивов «Galen», а также норм, определенных в литературных источниках: Назаренко Г.Н., Кишкун А.А. «Клиническая оценка результатов лабораторных исследований», Луговская С.А., Почтарь И.Е., Долгов И.Е. «Гематологические анализаторы».

Биологическим материалом для исследования служили кровь, сыворотка крови и пунктат костного мозга. Кровь бралась натощак, спустя 10-12 часов после приема пищи. Сыворотка тщательно отделялась от клеточных элементов крови, не позднее, чем через два часа после отбора проб [Лабораторные методы исследования в клинике, 1991].

Все гематологические тесты (кроме определения СОЭ) проводились автоматически анализатором — Sysmex KX-21, являющийся автоматическим многометрическим счетчиком клеток крови, используемый для in vivo диагностики. Обрабатывает приблизительно 60 образцов в час, выводя на экран системного компьютера результаты 18 возможных аналитических параметров.

Исследовали следующие гематологические параметры крови: количество эритроцитов, количество лейкоцитов, количество тромбоцитов;

гематокрит, среднее содержание гемоглобина в эритроците, средний объем эритроцита, уровень гемоглобина, СОЭ.

Колличественное определенние витамина В12 проводилось анализатором IMMULITE 1000. Данный аппарат автоматически выполняет хемилюминесцентный иммунологический анализ в двух режимах Стандартный и Турбо (последний отличается от первого только временем получения результата). Количество анализируемых проб составляет до 12 за цикл/

Все биохимические тесты проводились на биохимическом автоматическом биоанализаторе SYNCHRON CX фирмы Beckman coulter.

Исследовали следующие биохимические параметры сыворотки крови: содержание общего билирубина, содержание прямого и непрямого билирубина, содержание креатинина, содержание мочевины, активность аспартатаминотрансферазы, активность аланинаминотрансферазы, активность лактатдегидрогеназы, активность щелочной фосфотазы, содержание железа.

2.2.1 Определение количества эритроцитов, лейкоцитов, тромбоцитов методом DC детекции

В основе лежит апертурно-импендансный метод, принцип метода основан на подсчете числа и определении характера электрических импульсов

Клетки крови, суспензированные в разведенном образце, всасываются через микроскопическое отверстие, с обеих сторон которого проведено по платиновому электроду. Скачкообразные повышения сопротивления, возникающие при прохождении частиц через апертуру, вызывают электрические импульсы, амплитуда которых прямо пропорциональна объему частиц.

Подсчет количества эритроцитов, лейкоцитов и тромбоцитов осуществляется путем измерения амплитуды электрического сигнала при прохождении через апертуру: эритроциты и лейкоциты в следствие больших размеров — импульсы высокой амплитуды, тромбоциты — низкой амплитуды. Для подсчета количества лейкоцитов отдельно от эритроцитов производят разрушение последних до очень мелких осколков с помощью лизирующего реагента. Проба подсчитывается повторно, что позволяет определить количество лейкоцитов. Затем из суммы импульсов высокой амплитуды первого подсчета вычитаются импульсы высокой амплитуды второго подсчета. Разница между числом импульсов высокой амплитуды до и после добавления лизирующего реагента соответствует количеству эритроцитов [Кишкун.А.А.,2010].

2.2.2 Определение гематокрита

Отражает сумму прямо измеренных объемов эритроцитов в единице объема крови.

Принцип метода: основан на отражении общего объема, занимаемого эритроцитами, в ходе определения суммы амплитуд импульсов при подсчете количества эритроцитов

Является расчетным параметром, определяющимся по формуле:

2.2.3 Определение среднего содержания гемоглобина в эритроците

Принцип метода: расчетная величина.

Аппарат производит асчет параметра формуле:

MCH-среднее содержание гемоглобина в эритроците (пг).

2.2.4 Определение среднего объема эритроцита

MCV-средний объем эритроцита, выражается в кубических микрометрах (мкм3) или фемолитрах (1 фл=1 мкм3 или 1Ч10-13/л).

Принцип метода: основан на прямой зависимости амплитуды электрического импульса от объема клетки.

Ход определения: Определяется делением гематокритной велечины на количество эритроцитов.

2.2.5 Определение концентрации гемоглобина

Принцип метода: концентрация гемоглобина в кровианализатор определяет фотометрическим методом после лизиса эритроцитов.

Лизирующий реагент разрушает эритроциты, после чего определяется количество гемоглобина фотометрически.

Определение СОЭ осуществляется микрометодом в модификации Панченкова.

Принцип метода: основан на разделении крови в пробирке с добавлением антикоагулянта на два слоя: верхний (плазма) и нижний (осевшие эритроциты).

Кровь помещают в пробирку с цитратом и после тщательного перемешивания набирают в специальный градуированный капилляр, имеющий просвет 1 мм и длину 100 мм, до метки «0». Капилляр с цитротной кровью ставят в штатив вертикально между двумя резиновыми прокладками и оставляют на 1 час. Затем определяют величину по столбику плазмы над осевшими эритроцитами. Деление капиллярной пипетки, соответствующее границе плазмы и эритроцитов, записывабют как величину СОЭ в мм в час [Анализы. Полный справочник, 2007]

2.2.7 Иммунологический метод исследования определения витамина В12

Принцип метода: основан на реакции антиген — антитело с последующей регистрацией интенсивности хемилюминесценции, зависящей от влияния количества анализируемого вещества.

Читайте также:  Тельца жоли кольца кебота при какой анемии

Оператор загружает исследуемые пробы в штативы для пробирок с тест единицами, содержащими покрытые антителами пластиковые шарики в качестве твердой фазы. Эта тест единица служит сосудом, в котором происходит иммунологическая реакция, процессы выдержки и промывки, и вырабатывается сигнал. Система IMMULITE 1000 автоматизирует весь дальнейший процесс анализа. Дозатор добавляет пробу и реактив щелочная фосфотаза в тест единцу. После инкубации при 37 С в течение 30-60 минут(в зависимости от анализа) жидкая реактивная смесь в тест-единице быстро отделяется от шарика, когда шарик промывается и тест-единица вращается с высокой скоростью вокруг вертикальной оси. Вся жидкость (проба, дополнительный реактив и раствор для промывки) перемещается в коаксиальную камеру для отходов в тест единице. Шарик остается без остаточной, несвязанной метки. Для связанной метки выполняется количественная оценка с помощью диаксетанового хемилюминесцирующего субстрата, испускающего свет. Световое излучение фиксируется трубкой фотоумножителя и для каждой пробы компьютер системы печатает отчеты.

2.2.8 Определение общего билирубина

Принцип метода: билирубин вступает в реакцию азосочетания с диазотированной сульфаниловой кислотой с образованием раствора азокрасителя (голубой цвет). Интенсивность окраски пропорциональна содержанию билирубина и измеряется фотометрически.

Точные объемы реагента и образца вносились в реакционную кювету в следующем соотношении: одна часть образца на 35 частей реагента. Изменение поглощения измерялось при 520 нм [Камышников В.С., 2007].

2.2.9 Определение количество прямого билирубина

Принцип метода: базируются на регистрации кинетики реакции образования азобилирубина при взаимодействии билирубина с диазореактивом.

Точные объемы реагента и образца автоматически вносятся в реакционную кювету в следующем соотношении: одна часть образца на 32 части реагента. Изменение поглощения измеряется при 560 нм. Изменение поглощения прямо пропорционально концентрации прямого билирубина в образце и используется анализатором серии SYNCHRON CX®для расчет.

2.2.10 Определение активности аланинаминотрансферазы

Принцип метода — определение основано на измерении оптической плотности гидразонов 2-оксоглутаровой и пировиноградной кислоты в щелочной среде. Гидразон пировиноградной кислоты имеет более высокую оптическую плотность.

Точные объемы реагента и образца автоматически вносились в реакционную кювету в следующем соотношении: одна часть образца на 11 частей реагента. Изменение поглощения измерялось при 340 нм. Изменение поглощения прямо пропорционально активности аланинаминотрансферазы в образце и использовалось анализатором. Расчет производился по калибровочному графику [Анализы. Полный справочник, 2007].

2.2.11 Определение активности аспартатаминотрансферазы

Принцип метода — определение основано наизменении оптической плотности гидразонов 2-оксоглутаровой и пировиноградной кислот в щелочной среде. Гидразон пировиноградной кислоты, возникающий при самопроизвольном декарбоксилировании оксалооцетата, обладает более высокой оптической плотностью.

Точные объемы реагента и образца вносились в реакционную кювету в следующем соотношении: одна часть образца на 11 частей реагента. Изменение поглощения измерялось при 340 нм. Изменение поглощения прямо пропорционально активности аспартатаминотрансферазы в образце и использовалось анализатором. Расчет производился по калибровочному графику [Анализы. Полный справочник, 2007].

2.2.12 Определение активности лактатдегидрогеназы

Пинцип метода: Основан на оптическом различии спектров поглощения окисленной и восстановленной форм НАД

2,3 Лактатдегидрогеназа катализирует обратимое окисление L-лактата до пирувата с сопряженным восстановлением в-никотинамидадениндинуклеотида (NAD).

Точные объемы реагента и образца вносятся в реакционную кювету в следующем соотношении:одна часть образца на 20 частей реагента. Изменение поглощения измеряется при 340 нм. Изменение поглощения прямо пропорционально активности лактатдегидрогеназы в образце и используется анализатором серии SYNCHRON CX® для расчета

2.2.13 Определение мочевины

Принцип метода — мочевина под действием уреазы разлагается на углекислый газ и аммиак, который в щелочной среде с гипохлоридом натирия и фенолом образует индофенол синего цвета (уреазный метод).

Объемы образца и реагента автоматически вносятся в кювету в соотношении: одна часть образца на 100 частей реагента. Интенсивность окраски определяется фотометрически при длине волны 340 нм. Изменение поглощения прямо пропорционально концентрации мочевины в образце и используется анализатором для расчета [Анализы, полный справочник, 2007].

2.2.14 Определение креатинина

Принцип метода — в щелочной среде пикриновая кислота взаимодействует с креатинином с образованием оранжево-красной окраски (реакция Яффе).

К образцу добавляли щелочной раствор пикрата, в соотношении 1:33. В результате реакции образовывался окрашенный комплекс, интенсивность окраски определяли фотометрически (л = 520-560нм) [Анализы. Полный справочник, 2007].

2.2.15 Определение количество железа

Принцип метода: основан на диссоциация железа из комплекса с трансферрином, что достигается снижением pH (оптимальное значение 4,8_5,0) с помощью органических (обычно уксусной) кислот, с последующим восстановлением иона железа (с помощью гидразина, меркаптоацетата, сульфита, гидроксиламина, тиогликолевой и аскорбиновой кислот). Взаимодействие с комплексоном и формирование железо_хелатированного хромогенного комплекса, определяющегося калориметрически.

Точные объемы реагента и образца автоматически вносятся в реакционную кювету в следующем соотношении: одна часть образца на 8 частей реагента. .Изменение поглощения измеряется при 560 нм. Изменение поглощения прямо пропорционально концентрации железа в образце и используется анализатором серии SYNCHRON CX® для расчета.

2.2.16 Определение активности щелочной фосфатазы

Принцип метода — мерой каталитической активности щелочной фосфатазы путем регистрации кинетики реакции, протекающей в буферном растворе, содержащим 2-амино-2-метил-1-пропанол, является количество освобожденного р-нитрофенола. Щелочная фосфатаза катализирует гидролиз бесцветного органического эфира фосфорной кислоты, р-нитрофенилфосфата, до р-нитрофенола, окрашенного в желтый цвет, и фосфата.

Точные объемы реагента и образца вносились автоматически в реакционную кювету в следующем соотношении: одна часть образца на 50 частей реагента. Измерение поглощения прямо пропорционально активности щелочной фосфатазы в образце и использовалось анализатором. Расчет производился по калибровочному графику [Анализы. Полный справочник, 2007].

2.2.17 Исследования костного мозга

Принцип метода: Основан на взятии костного мозга путем пункции грудины по методу Аринкина при помощи иглы Кассирского с последующим рассмотрением и подсчетом его клеточного состава под микроскопом.

Производят прокол рукоятки или тела грудины на уровне 3-4 ребра по средней линии. Полученный мазок переносят на часовое стекло и сразу же готовят из него тонкие мазки. Мазки высушивают при комнатной температуре и затем фиксируют по Май-Грюнвельду (краска-фиксатор) в течение 2-3 минут. Окраска мазков поизводится по Романовскому. При этом окрашивание различных элементов клеток в разные цвета и оттенки производится в течение 20-25 минут смесью основных (азур 2) и кислых (водорастворимый желтый эозин) красок. Мы использовали готовый раствор краски Романовского. После окончания окраски краска смывалась под струей воды и мазки просушивались. Аналогично производилось окрашивание мазков периферической крови). Затем производилось морфологическое исследование мазков. При этом подсчет красного ростка происходит с дифференцировкой эритроидного и мегалобластического типов кроветворения. Отличие мегалобластического типа от нормального определяли по изменению морфологии ядра и цитоплазмы нормацитов различных стадий созревания:

Ядро теряет нормальную структуру, хроматин становится однородным.

Цвет цитоплазмы не соответствует степени созревания ядра, может наблюдаться вакуолизация цитоплазмы.

При исследовании обращалось внимание на увеличение размеров гранулоцитов (гигантские палочки и гиперсегментированные нейтрофилы).

2.3 Методы математической обработки результатов

Математическая обработка результатов проводилась стандартными методами по Г.Ф. Лакину (1980). Нами было определено средняя арифметическая величина Х показателей в каждой группе, стандартная ошибка средней арифметической (±m), достоверность различий по критерию Стьюдента (t) различия считаются достоверными при Р ?0,05.

3. Изменение и значимость гематологических показателей при анемии В12

При проведении гематологического анализа периферической крови у больных В12-дифицитной анемией были выявлены ряд тестов, наиболее ярко отражающие наличие патологических процессов соответствующих клинике заболевания, и, следовательно, использующихся при постановке диагноза. Значительное изменение гематологических показателей в основном было связано с изменением характеристик клеток «красной» крови, то есть клеток продуцируемых эритроидным ростком костного мозга, а так же частично клеток лейкоцитарного и мегакариоцитарных ростков. Вследствие чего, особое внимание уделялось таким показателям как: количество эритроцитов(RBC), гематокрит(HTC), средний объем эритроцита(MCV), гемоглобин(HB), среднее содержание гемоглобина в эритроците(MCH). Так же были определено количество лейкоцитов и тромбоцитов, СОЭ периферической крови.

Обобщающие данные приведены в таблице 1.

Таблица 1-Изменение гематологических показателей периферической крови у больных анемией В12,(X±m)

источник

Комплексное исследование количественного и качественного состава форменных элементов и биохимических показателей крови, которое позволяет оценить насыщенность организма железом и обнаружить недостаточность данного микроэлемента даже до появления первых клинических признаков железодефицита.

Результаты исследований выдаются с бесплатным комментарием врача.

Колориметрический фотометрический метод, SLS (натрий лаурил сульфат) – метод, кондуктометрический метод, проточная цитофлуориметрия, иммунотурбидиметрия.

Мкмоль/л (микромоль на литр), *10^9/л, *10^12/л, г/л (грамм на литр), % (процент), фл (фемтолитр), пг (пикограмм).

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Как правильно подготовиться к исследованию?

  1. Исключить из рациона алкоголь за 24 часа до исследования.
  2. Прекратить принимать пищу за 8 часов до исследования, можно пить чистую негазированную воду.
  3. Не употреблять лекарственные препараты в течение 24 часов перед анализом (по согласованию с врачом).
  4. Исключить прием лекарственных препаратов, содержащих железо, в течение 72 часов до исследования.
  5. Исключить физическое и эмоциональное перенапряжение и не курить в течение 30 минут до исследования.

Общая информация об исследовании

Нехватка железа встречается довольно часто. Около 80-90 % всех форм анемий связано с дефицитом данного микроэлемента.

Железо содержится во всех клетках организма и выполняет несколько важных функций. Основная его часть входит в состав гемоглобина и обеспечивает транспорт кислорода и углекислого газа. Некоторое количество железа является кофактором внутриклеточных ферментов и участвует во многих биохимических реакциях.

Железо из организма здорового человека постоянно выводится с потом, мочой, слущивающимися клетками, а также менструальными выделениями у женщин. Для поддержания количества микроэлемента на физиологическом уровне необходимо ежедневное поступление в организм 1-2 мг железа.

Всасывание данного микроэлемента происходит в двенадцатиперстной кишке и верхних отделах тонкой кишки. Свободные ионы железа токсичны для клеток, поэтому в организме человека они транспортируются и депонируются в комплексе с белками. В крови железо переносится белком трансферрином к местам использования или накопления. Апоферритин присоединяет железо и образовывает ферритин, который является основной формой депонированного железа в организме. Его количество в крови взаимосвязано с запасами железа в тканях.

Общая железосвязывающая способность сыворотки (ОЖСС) является непрямым показателем уровня трансферрина в крови. Она позволяет оценить максимальное количество железа, которое может присоединить транспортный белок, и степень насыщения трансферрина микроэлементом. При уменьшении количества железа крови насыщение трансферрина снижается и, соответственно, ОЖСС возрастает.

Дефицит железа развивается постепенно. Вначале возникает отрицательный баланс железа, при котором потребности организма в железе и потери данного микроэлемента превышают объемы его поступления с пищей. Это может быть связано с потерей крови, беременностью, скачками роста в период полового созревания или недостаточным употреблением продуктов, содержащих железо. В первую очередь железо мобилизируется из запасов ретикулоэндотелиальной системы для компенсации потребностей организма. Лабораторные исследования в этот период выявляют уменьшение количества ферритина сыворотки крови без изменения других показателей. Вначале клинические симптомы отсутствуют, уровень железа в крови, ОЖСС и показатели клинического анализа крови находятся в пределах референсных значений. Постепенное истощение депо железа в тканях сопровождается повышением ОЖСС.

На этапе железодефицитного эритропоэза синтез гемоглобина становится недостаточным и развивается железодефицитная анемия с клиническими проявлениями малокровия. В клиническом анализе крови обнаруживаются небольшие бледноокрашенные эритроциты, снижаются показатели МНС (среднее количество гемоглобина в эритроците), MCV (средний объем эритроцита), МСНС (средняя концентрация гемоглобина в эритроците), падает уровень гемоглобина и гематокрит. При отсутствии лечения количество гемоглобина в крови прогрессивно снижается, изменяется форма красных кровяных телец, сокращается интенсивность деления клеток в костном мозге. Чем глубже дефицит железа, тем ярче становится клиническая симптоматика. Утомляемость переходит в выраженную слабость и вялость, утрачивается трудоспособность, бледность кожных покровов становится более выраженной, изменяется структура ногтей, появляются трещины в углах губ, возникает атрофия слизистых, кожа становится сухой, шелушащейся. При дефиците железа у больного меняется способность чувствовать вкус и запах – возникает желание есть мел, глину, сырые крупы и вдыхать запахи ацетона, бензина, скипидара.

При своевременной и правильной диагностике железодефицита и причин, вызвавших его, лечение препаратами железа позволяет восполнить запасы этого элемента в организме.

Для чего используется исследование?

  • Для ранней диагностики железодефицита.
  • Для дифференциальной диагностики анемий.
  • Для контроля за лечением препаратами железа.
  • Для обследования лиц, у которых существует высокая вероятность железодефицита.

Когда назначается исследование?

  • При обследовании детей в период интенсивного роста.
  • При обследовании беременных.
  • При симптомах недостаточности железа в организме (бледность кожных покровов, общая слабость, утомляемость, атрофия слизистой языка, изменение структуры ногтей, аномальные вкусовые предпочтения).
  • При выявлении гипохромной микроцитарной анемии по данным клинического анализа крови.
  • При обследовании девушек и женщин с обильными менструальными выделениями и маточными кровотечениями.
  • При обследовании ревматологических и онкологических больных.
  • При контроле за эффективностью применения препаратов, содержащих железо.
  • При обследовании пациентов с астенией неясного генеза и выраженной утомляемостью.

источник