Иммунофлюоресценция при амилоидозе

Иммунофлюоресцентный метод (РИФ, реакция иммунофлюоресценции, реакция Кунса) — метод выявления специфических АГ с помощью АТ, конъюгированных с флюорохромом. Обладает высокой чувствительностью и специфичностью.

Применяется для экспресс-диагностики инфекционных заболеваний (идентификация возбудителя в исследуемом материале), а также для определения АТ и поверхностных рецепторов и маркеров лейкоцитов (иммунофенотипирование) и др. клеток.

Обнаружение бактериальных и вирусных антигенов в инфекционных материалах, тканях животных и культурах клеток при помощи флюоресцирующих антител (сывороток) получило широкое применение в диагностической практике. Приготовление флюоресцирующих сывороток основано на способности некоторых флюорохромов (например, изотиоцианата флюоресцеина) вступать в химическую связь с сывороточными белками, не нарушая их иммунологической специфичности.

Различают три разновидности метода: прямой, непрямой, с комплементом. Прямой метод РИФ основан на том, что антигены тканей или микробы, обработанные иммунными сыворотками с антителами, меченными флюорохромами, способны светиться в УФ-лучах люминесцентного микроскопа. Бактерии в мазке, обработанные такой люминесцирующей сывороткой, светятся по периферии клетки в виде каймы зеленого цвета.

Непрямой метод РИФ заключается в выявлении комплекса антиген — антитело с помощью антиглобулиновой (против антитела) сыворотки, меченной флюорохромом. Для этого мазки из взвеси микробов обрабатывают антителами антимикробной кроличьей диагностической сыворотки. Затем антитела, не связавшиеся антигенами микробов, отмывают, а оставшиеся на микробах антитела выявляют, обрабатывая мазок антиглобулиновой (антикроличьей) сывороткой, меченной флюорохромами. В результате образуется комплекс микроб + антимикробные кроличьи антитела + антикроличьи антитела, меченные флюорохромом. Этот комплекс наблюдают в люминесцентном микроскопе, как и при прямом методе.

Механизм. На предметном стекле готовят мазок из исследуемого материала, фиксируют на пламени и обрабатывают иммунной кроличьей сывороткой, содержащей антитела против антигенов возбудителя. Для образования комплекса антиген — антитело препарат помещают во влажную камеру и инкубируют при 37 °С в течение 15 мин, после чего тщательно промывают изотоническим раствором хлорида натрия для удаления не связавшихся с антигеном антител. Затем на препарат наносят флюоресцирующую антиглобулиновую сыворотку против глобулинов кролика, выдерживают в течение 15 мин при 37 °С, а затем препарат тщательно промывают изотоническим раствором хлорида натрия. В результате связывания флюоресцирующей антиглобулиновой сыворотки с фиксированными на антигене специфическими антителами образуются светящиеся комплексы антиген — антитело, которые обнаруживаются при люминесцентной микроскопии.

22. Иммуноферментный анализ — лабораторный иммунологический метод качественного или количественного определения различных соединений, макромолекул, вирусов и пр., в основе которого лежит специфическая реакции антиген-антитело. Выявление образовавшегося комплекса проводят с использованием фермента в качестве метки для регистрации сигнала.

Классификация:

Конкурентный (в системе одновременно присутствует анализируемое соединение и его аналог)

Неконкурентный (Если в системе присутствуют только анализируемое соединение и соответствующие ему центры связывания (антиген и специфические антитела))

1.сыворотку,содержащую смесь ат, инкубируют с аг, фиксированным на твердом субстрате.

2.ат,не связывающие аг, удаляют многократным промыванием.

3. вносят меченную ферментом антисыворотку к ат, связывавшим аг

4.определят количество фермента-маркера, связавшегося с ат

1.специфические ат в иследуемой сыворотке связывают аг, фиксированный на твердом субстрате

2. специфичные ат, меченные ферментом,не взаимодействуют со связанным аг-содержание маркера в субстрате низкое

1. Неспецифические ат в исследуемой сыворотке не связывают аг, фиксированный на твердом субстрате

2. Специфические ат, меченные ферментом, взаимодействуют, с фиксированным аг –содержание маркера высокое

Наиболее распространен твердофазный ифа, при котором один из компонентов иммунной реакции(антиген или антитело) сорбирован на твердом носителе. В качестве твердого носителя используется микропанели из полистирола. При определении антител в лунки с сорбированным антигеном последовательно добавляют сыворотку крови, меченную ферментом, и смесь растворов для фермента и хромогена. Каждый раз после добавления очередного компонента из лунок удаляют не связавшиеся реагенты путем тщательного промывания. При положительном результате изменяется цвет раствора хромогена.

Твердофазный носитель можно сенсибилизировать не только антигеном, но и антителом. Тогда в лунки с сорбированными антителами вносят искомый антиген, добавляют иммунную сыворотку против антигена, меченную ферментом, а затем-смесь растворов субстрата для фермента и хромогена.

Применение:для диагностики заболеваний, вызванных вирусными и бактериальными возбудителями.

23. Серологическая реакция — реакция, с помощью которой исследуется реакция антигена (микроба, вируса, чужеродного белка) с антителами сыворотки крови.

Серологические исследования — это методы изучения определенных антител или антигенов в сыворотке крови больных, основанные на реакциях иммунитета. С их помощью также выявляют антигены микробов или тканей с целью их идентификации.

Обнаружение в сыворотке крови больного антител к возбудителю инфекции или соответствующего антигена позволяет установить причину заболевания.

Серологические исследования применяют также для определения антигенов групп крови, тканевых антигенов и уровня гуморального звена иммунитета.

Серологические исследования включают в себя различные серологические реакции:

4. Реакция с участием комплемента.

5. Реакция с использованием меченых антител или антигенов.

источник

А милоидоз — общее определение для группы заболеваний, которых объединяет отложение в различных тканях и органах белка амилоида. На сегодня известно больше 20 предшественников амилоида, которые при благоприятных обстоятельствах депонируются в тех или иных частях тела.

Амилоид имеет фибриллярную структуру, которая была определена при изучении белка под электронным микроскопом.

Для амилоидоза сердца характерно быстрое прогрессирование, поэтому лечение является наиболее эффективным на раннем этапе развития болезни. Если же адекватное терапия не проводится, тогда за один месяц стенка сердца может утолщаться на 1,5 мм и более, а это грозит очень быстрой сердечной недостаточностью и смертью (примерно через 6 мес).

Видео: Что такое амилоидоз, чем он опасен, как с ним бороться?

Термин “амилоидоз” относится не к одной патологии, а к совокупности заболеваний, при которых инфильтрат на основе белка откладывается в тканях как бета-плиссированные листы. Подтип заболевания определяется тем, какой белок осаждается, хотя описаны десятки подтипов, большинство из них невероятно редки или имеют тривиальное значение.

Обозначения

В правильной номенклатуре используется буква “А” для амилоида, за которой следуют буква(ы), относящиеся к основному депонированному белку. Например, амилоидоз легкой цепи представляет собой “AL” (“А” для амилоида и “L” для легкой цепи). Амилоидоз транстиретина определяется как “ATTR” (“A” для амилоида и “TTR” для транстиретина). Такие термины, как “первичный амилоидоз”, “вторичный амилоидоз”, “старческий амилоидоз” и “семейная амилоидная кардиомиопатия”, часто приводят к путанице, поэтому их лучше всего избегать.

В подавляющем большинстве сердечный амилоидоз вызывается одним из двух белков: легкими цепями или транстиретином. Клинические проявления и лечение этих двух подтипов между собой отличаются.

Является наиболее часто диагностируемой формой системного амилоидоза. Также раньше определялся как “первичный амилоидоз”, но по приведенным выше причинам это названием не будет использоваться.

Плазменные клетки находятся в основном в костном мозге и продуцируют большое количество антител. Антитела состоят из тяжелых цепей и легких цепей. Когда плазматическая клетка становится клоновой (по существу, превращается в злокачественную), она и ее клоны обычно продуцируют клональное антитело и клональный избыток легкой цепи, связанный с этим антителом. В этом процессе возможно три возможных исхода:

1. Клон плазменной клетки берет на себя небольшую часть костного мозга, и легкая цепь безвредно выводится с мочой. Это состояние называется моноклональной гаммапатией неопределенного значения.
2. Клон плазменной клетки поглощает большую часть костного мозга, что потенциально приводит к гиперкальциемии, анемии, литическим поражениям и / или почечной дисфункции. Это состояние называется миеломой.
3. Клон плазменной клетки продуцирует легкую цепь, которая склонна к неправильной замене на бета-плиссированные листы (β-складчатый слой). Эти легкие цепи циркулируют в кровотоке и осаждаются в одной или нескольких тканях. Это состояние называется AL-амилоидозом.

AL-амилоидные отложения могут встречаться практически в любой ткани, а характер участия органа варьируется от пациента к пациенту (таблица 1).

Распространенные внесердачные участки поражения и связанные с ними проявления следующие:

• почки (альбуминурия и потенциальная почечная недостаточность);
• печень (повышение щелочной фосфатазы и потенциальная печеночная недостаточность);
• желудочно-кишечный тракт (дисфагия, запор, мальабсорбция и кровотечение);
• язык (макроглоссия);
• нервная система (периферическая невропатия и вегетативная дисфункция).

В крайне редких случаях у одного больного определяется клиническое участие всех этих органов и систем.

Таблица 1: Амилоидные подтипы и клинические характеристики

Сердечные проявления при амилоидозе следующие:

1. Сердечная недостаточность (СН), которая может быть диастолической и систолической.
2. Аритмии (тахиаритмии / брадиаритмии).

Основным признаком является желудочковая гипертрофия, наблюдаемая при эхокардиографии с очень низким электрическим напряжением электрокардиограммы (ЭКГ).

Натрийуретические пептиды обычно повышаются при амилоидозе сердца, а анализы тропонина часто хронически положительны при низких уровнях (0,1-1 нг / мл) из-за продолжающегося постепенного разрушения кардиомиоцитов.

Транстиретин (преальбумин) представляет собой белок, продуцируемый печенью, который функционирует как транспортер тироксина и ретинола. Он преимущественно циркулирует как гомотетрамер с небольшим количеством транстиретина, находящегося в мономерной форме. Эта форма транстиретина подвержена неправильной замене и постепенно откладывается в виде амилоидных отложений.

Существуют два основных подтипа АТТR амилоидоза:

1. ATTR дикого типа
2. Мутантный ATTR.

В случае АТТR дикого типа белок транстиретина является нормальным (немутированным). В течение десятилетий он постепенно откладывается в виде амилоидных накоплений. Хотя небольшое количество отложений может возникать в мягких тканях (вызывающих синдром кистевого туннеля) и сосудистой сети, первичные патологические отложения определяются в сердце.

Мутантный тип ATTR амилоидоза сердца является наследственным заболеванием. При нем определяются патологические мутации в транстиретиновом гене, что приводит к ускоренному отложению амилоида. Мутантный АТТR наиболее часто поражает и нервные волокна, причем картина осаждения в значительной степени зависит от мутации.

Окончательный диагноз амилоидоза требует биопсии. Для проведения процедуры зачастую выбирается абдоминальная жировая прослойка, поскольку это место характеризуется легкой доступностью и низкой заболеваемостью. Однако этот участок тела обладает относительно низкой чувствительностью, поэтому даже в положительных случаях часто получаются неадекватные амилоидные отложения, свойственные для окончательного подтипа болезни (АТТR, АL и т. д.). Таким образом, практикуется биопсия органа, вовлеченного в патологический процесс (т. е. сердца при подозрении на сердечный амилоидоз).

При проведении эндомиокардиальной биопсии дается почти 100% достоверный результат о наличии или отсутствии амилоидоза сердца.

Определение подтипа амилоидоза сердца может быть выполнено иммунофлюоресценцией или образцы отправляются в лабораторию для проведения масс-спектрометрии. Если есть какие-либо сомнения относительно диагноза, основанного на окрашивании иммунофлюоресценцией, должна быть проведена масс-спектрометрия.

Дополнительные лабораторные тесты при AL-амилоидозе позволяют определить другую дисфункцию органа:

• протеинурию;
• концентрацию щелочной фосфатазы;
• количество циркулирующих легких цепей.

Анализы на концентрацию легких цепей могут быть полезны в качестве постановки предположительного диагноза до выполнения биопсии. В частности, нормальная величина циркулирующих легких цепей делают диагноз AL-амилоидоза маловероятным. Так подобные исследования необходимы для контроля реакции на химиотерапию.

При ATTR-амилоидозе проводится генетическое тестирование на определение гена транстиретина. Наличие патологической мутации может влиять на варианты клинических испытаний, прогнозирование участия органов и указывать на предположительное отношение к членам семьи.

Электрокардиография — важное исследование при любой форме сердечного амилоидоза. С ее помощью обнаруживается гипертрофия желудочков. Гипертрофия при амилоидозе представляет собой отложение амилоидных фибрилл, а не гипертрофию / гиперплазию миоцитов. Это объясняет сниженное напряжение ЭКГ, а не увеличенное, как это бывает при типичной гипертрофии.

Магнитно-резонансная томография сердца также проводится при подозрении на амилоидоз. В частности, может определяться глобальное трансмуральное или субэндокардиальное распределение сердечной ткани.

Эхокардиография — зачастую определяются деформации и базальные-, апикально-преобладающие нарушения.

Видео: Сердце при амилоидозе

Лечение AL-амилоидоза проводится согласно двум параллельным стратегиям:

1. Устранение последствий дисфункции органа, то есть проводится симптоматическая терапия.
2. Замедление прогрессирования заболевания, для чего убиваются клональные плазматические клетки (и, следовательно, уменьшается количество циркулирующих патологических легких цепей). Для этого используется химиотерапия.

Кардио-специфическое лечение

Практикуется при всех формах амилоидоза, с учетом ряда важных моментов:

• Делается акцент на регуляции объема жидкости в организме. Для этого применяются диуретики и ограничивается употребление соли.
• Дигоксин связывается с амилоидными фибриллами, что приводит к потенциальной интоксикации дигоксином даже при нормальных циркулирующих уровнях, поэтому этот препарат, как правило, избегают.
• При необходимости проводится контроль над аритмией. При этом нейрогормональные антагонисты, обычно используемые при СН, часто плохо переносятся и являются контрпродуктивными.
• Бета-блокаторы, ингибиторы ангиотензинпревращающего фермента и блокаторы рецепторов ангиотензина часто приводят к гипотонии (из-за вегетативной дисфункции и наличия небольшой полости левого желудочка с невозможностью увеличения объема).
• Дополнительно бета-блокаторы нередко усугубляют течение брадиаритмии.

Кардиостимуляторы необходимы при высокой распространенности болезни и снижении качества проводимости (особенно при ATTR-амилоидозе). Фибрилляция предсердий довольно распространена среди больных амилоидозом сердца и часто плохо переносится. Подобное состояние требует кардиоверсии и / или антиаритмической терапии (чаще всего амиодароном). Среди этой категории больных распространены желудочковые аритмии и внезапная сердечная смерть.

Исторически сложилось так, что имплантация кардиовертер-дефибрилляторов (КВД) не приобрела всеобщего признания из-за плохого прогноза, связанного с сердечным амилоидозом. Более свежие данные свидетельствуют о том, что КВД могут быть эффективной частью стратегии управления состоянием больных при амилоидозе сердца. В частности, имплантация устройства продлевает жизнь на 1 год и больше.

Трансплантация сердца

Поскольку сердечный амилоидоз является необратимым заболеванием и часто может быть связан с тяжелыми симптомами и высокими показателями смертности, трансплантация сердца рассматривается в качестве лечения отдельных пациентов. Дополнительно учитывается следующее:

• В лечении больных на AL-амилоидоз исключается возможность значительного участия других жизненно важных органов. При этом кардиальная трансплантация должна сопровождаться стратегией, основанной на химиотерапии для контроля производства легких цепей.
• При ATTR-амилоидозе должно быть исключено значительное неврологическое участие пациентов с семейными формами.

Во всех случаях рекомендуется проводить трансплантацию только в центрах, которые имеют практику по пересадке сердца пациентам с амилоидозом.

Химиотерапия

За последнее десятилетие возможности химиотерапии для лечения AL-амилоидоза заметно улучшились, так что у большинства больных достигается значительное сокращение (а иногда и полная нормализация) количества циркулирующих патологических легких цепей.

Химиотерапия обычно состоит из комбинации нескольких классов антинеопластов. В частности используется:

• алкилаторы (например, мелфалан или циклофосфамид);
• стероиды (например, дексаметазон);
• ингибиторы протеасомы (например, бортезомиб или карфилзомиб);
• иммуномодуляторы (например, леналидомид или помалидомид).

Альтернативная стратегия включает трансплантацию стволовых клеток (stem-cell transplant) на фоне высокодозной химиотерапии алкилирующим препаратом. Трансплантат со стволовыми клетками может быть эффективным методом снижения легких цепей, поэтому используется многими центрами.

Важно отметить, что единственное рандомизированное исследование, сравнивающее лечение стволовыми клетками со стандартной химиотерапией, показало, что трансплантат дает более низкие результаты. Также при использовании стандартных методов химиотерапии отмечаются более быстрые улучшения, поэтому пересадку стволовых клеток проводят редко, только в отдельных случаях.

Поскольку ATTR-амилоидоз не является злокачественным процессом, химиотерапия не играет настолько важную роль, как в случае с AL-амилоидозом. Несмотря на то, что в настоящее время не утверждены лекарства, модифицирующие болезнь, для лечения ATTR-амилоидоза были изучены некоторые препараты, часть из них находится на поздних стадиях клинической оценки. К ним относятся следующие:

1. Дифлунизал (Diflunisal). Этот нестероидный противовоспалительный препарат, который одобрен для лечения артрита, стабилизирует тетрамерную форму транстиретина. Рандомизированное исследование продемонстрировало замедление прогрессирования заболевания среди пациентов с полинейропатией из-за мутантного ATTR-амилоидоза. Поскольку нестероидные противовоспалительные препараты относительно противопоказаны при СН, это лекарство вряд ли является хорошим вариантом при наличии амилоидной кардиомиопатии.
2. Тафамидис(Tafam >Прогноз

Прогностическое заключение при амилоидозе зависит прежде всего от тяжести сердечного поражения. При AL-амилоидозе также имеет значение уровень циркулирующих легких цепей. Поскольку в последние годы возможности химиотерапии значительно расширились, прогноз при AL-амилоидоза заметно улучшился. Также средняя продолжительность жизни большинства пациентов, включая многих из тех, кто имеет значительное поражение сердца, уже измеряется не месяцами, как раньше, а годами.

Прогноз при ATTR-амилоидоз обычно лучше, чем при AL-амилоидозе, хотя обе формы заболевания по-прежнему характеризуются высокой годовой смертностью.

Для AL-амилоидоза были предложены различные системы составления прогностического заключения, причем основное внимание уделялось степени поражения сердца. Широко используемая система прогнозирования, опубликованная в 2004 году, основывалась исключительно на двух сердечных биомаркерах:

• тропонине (T или I);
• про-натрийуретической N-концевом пептиде В-типа.

Таким образом, постоянное улучшение схем химиотерапии с периода начатых изучений патологического состояния позволит повысить выживаемость больных на амилоидоз сердца.

• Отношение к амилоидозу сердца заметно изменилось за последнее десятилетие, при этом большее число больных было диагностировано, также заметно улучшились терапевтические возможности.
• Диагностические признаки амилоидоза сердца включают нетипичную гипертрофию желудочков с низким напряжением ЭКГ, необъяснимой СН и характерной дисфункцией других органов.
• Постановка окончательного диагноза основана на биопсии пораженного органа, к тому же это исследование имеет решающее значение для окончательного подтипирования амилоидных отложений (например, AL и ATTR).
• При AL-амилоидозе лечение должно начинаться незамедлительно с использованием принципов химиотерапии или трансплантации стволовых клеток.
• При ATTR-амилоидозе больные зачастую регистрируются для участия в одном из текущих клинических испытаний.
• Лечение сердца при амилоидозе в первую очередь основано на использовании диуретиков и аритмических препаратов.
• В отдельных случаях рассматривается возможность имплантации КВД или проведения трансплантации сердца.

Поскольку при амилоидозе сердца нередко требуется участие врачей различных специальностей, больному обычно рекомендуют обратиться в центр амилоидоза.

Видео: «Амилоиды — опасные белки внутри нас» Елена Венская

источник

ИММУНОФЛЮОРЕСЦЕНЦИЯ (лат. immunis свободный, избавленный от чего-либо + флюоресценция) — люминесценция в ультрафиолетовом свете микроскопа биологического объекта, содержащего изучаемый антиген после его предварительной обработки специфическими антителами, меченными флюорохромом.

Метод микроскопии, основанный на явлении (процессе) И., носит название метода Кунса, метода И., метода люминесцирующих антител (сывороток) и применяется в практике как экспресс-метод при микробиол. диагностике инфекционных заболеваний. Его применяют также при изучении патогенеза инфекционных заболеваний, механизма антителогенеза, антигенного анализа биол, объектов.

Иммунофлюоресцентный метод является универсальным иммунохим. методом, сочетающим в себе достаточно точный морфол, анализ со специфичностью и высокой разрешающей способностью иммунол, методов. Он основан на использовании явления люминесценции для выявления реакции антиген — антитело, происходящей на поверхности клеток или на срезах ткани.

Большое преимущество метода И. заключается в его простоте, высокой чувствительности, превосходящей некоторые другие серол, методы, а также в быстроте получения результатов. Можно, вероятно, локализовать и идентифицировать любое вещество, обладающее антигенными (гаптенными) свойствами, независимо от его природы и функции. Кроме того, метод И. вводит в круг исследований нерастворимые антигены тканей, которые недоступны изучению многими иммунол, методами, в частности иммунодиффузионными .

Метод И. был предложен в 1942 г. Кунсом (A. Coons) с соавторами и получил дальнейшее развитие в 50-х гг. после синтеза самого лучшего из существующих флюорохромов — изотиоцианата флюоресцеина (ФИТЦ). В эти же годы в СССР были начаты исследования по использованию этого метода и его совершенствованию.

Успех метода И. во многом зависит от качества люминесцирующих антител (сывороток), которые получают путем хим. реакции между специфическими антителами, содержащимися в иммунной сыворотке, и флюоресцирующим красителем — флюорохромом (см.). Полученный продукт реакции называют конъюгатом. В ряде случаев приготовление специфичных и активных конъюгатов — трудная задача. Обычно с флюоресцирующими красителями конъюгируют не цельные иммунные сыворотки, а фракции сывороточных белков, содержащих антитела. Причем чем лучше очистка от балластных белков, тем более качественный конъюгат можно получить впоследствии. Наилучшие результаты дает использование для метки препаратов чистых антител, но это, к сожалению, не всегда возможно. Качество конъюгата определяется также чистотой и активностью красителя, его количеством при метке, концентрацией белка и антител, величиной pH при метке, временем и температурой конъюгации, а также степенью очистки от балластных белков и избытка красителя и наличием гетеро логичных и нормальных антител.

Флюорохромы — это такие красители, которые способны поглощать свет и излучать его через короткий промежуток времени (10 -6 —10 -9 сек.). Интенсивность флюоресценции пропорциональна интенсивности возбуждающего излучения, и при малых концентрациях вещества возможно количественно определить флюоресцирующее вещество на микроскопическом или цитол, препарате.

К флюорохромам, предназначенным для метки специфического белка, предъявляются следующие основные требования: цвет их флюоресценции должен отличаться от аутофлюоресценции объекта и контрастировать с фоном; они должны обладать высокой интенсивностью флюоресценции после присоединения к белку и не должны существенно изменять физ.-хим. и серол, свойства антител.

В практике используют флюорохромы, имеющие желто-зеленую, желтую и красную люминесценцию. Кроме ФИТЦ, применяют сульфохлорид родамина 200В (PCX), сульфофторид родамина 200В (РСФ), тетраметилродамин изотиоцианат (МРИТЦ), дихлортриазиниламинофлюоресцеин (ДХТАФ) и др.

Конъюгация белка с флюорохромом является хим. реакцией, в результате чего образуется новое соединение, в к-ром краситель присоединен к белку ковалентной связью. В реакции участвуют в основном ε-аминогруппы лизина и концевые аминогруппы белковой молекулы.

Метод И. применяется в трех основных модификациях. При прямом методе [Кунс, Каплан (М. Kaplan), 1950] на препарат, содержащий искомый антиген, наносят специфическую люминесцирующую сыворотку (антитело). После реакции препарат промывают и изучают под люминесцентным микроскопом. Преимуществом этого метода является его одноэтапность и использование небольшого количества контролей реакции.

При непрямом методе [Уэллер (Т. Weller), Кунс, 1954] препарат, содержащий искомый антиген, обрабатывают специфической немеченой сывороткой, несвязавшиеся белки отмывают и наносят люминесцирующую сыворотку к глобулинам немеченой сыворотки. В этом случае в качестве антигенов выступают связанные препаратом антитела первой сыворотки — немеченой. Преимуществом данной модификации является большая чувствительность, чем у прямого метода, и возможность использования ограниченного набора люминесцирующих антител.

Непрямой метод с комплементом [Гольдвассер, Шепард (В. Goldwasser, С. Shepard), 1958] является трехэтапным. Этот вариант заключается в использовании меченой антикомплементарной сыворотки, которая присоединяется к комплементу комплекса антиген — антитело. В такой постановке меченая сыворотка оказывается еще более универсальной.

К. А. Лебедевым с соавторами (1971) описана возможность проведения непрямого метода с использованием двух люминесцирующих сывороток (как антител против выявляемого антигена, так и антител против иммуноглобулинов того вида животных, от которых получена первая специфическая сыворотка).

Прямой метод выявления антител с помощью меченого антигена впервые применил Меллорс (В. Mellors) с соавт, в 1959 г. для доказательства присутствия ревматоидного фактора в определенных клетках организма. Этот вариант метода имеет ограниченное применение.

Во всех вариантах Иммунохим, сущность метода остается неизменной: локализация антигена в препарате обнаруживается по специфической флюоресценции в месте реакции антиген — антитело.

Методика приготовления препаратов различна и зависит от типа исследуемого препарата. Изучению подвергают мазки, мазки-отпечатки из органов, срезы органов, культуру ткани и пр. Для каждого антигена применяют свои фиксаторы. Препараты изучают под люминесцентным микроскопом (МЛ-2, МЛД-1, ЛЮМAM-2 и др.).

В связи с тем что в реакции И. участвует много компонентов, оценка надежности и точности результатов является обязательной частью исследования независимо от природы антигена, свойств и характеристики антител. Поэтому проводят контроль иммунол, специфичности наблюдаемого на препарате свечения и последовательно убеждаются в специфичности меченой сыворотки, качестве ее очистки, доказывают иммунол. характер обнаруживаемого свечения, проводят контроль фонового свечения с нормальной сывороткой, убеждаются в отсутствии реакции за счет антител к посторонним веществам и определяют иммунол, специфичность наблюдаемой реакции. Только после этого делают заключение о специфичности наблюдаемой реакции.

С целью повышения специфичности непрямого метода И. при выявлении тканевых антигенов применяют в качестве реактива меченые чистые антитела или конъюгаты с высоким титром антител, адсорбированные предварительно тканевыми порошками либо гомогенатами, не содержащими антигена, родственного специфическому антителу.

При выявлении бактерий, вирусов, риккетсий, простейших пользуются методами контрастирования неспецифического свечения. С этой целью используют бычий (или иной) альбумин, меченный родамином, синьку Эванса, конго красный и некоторые диазокрасители. При использовании метода контрастирования создают люминесцирующий фон, по цвету контрастирующий со специфическим свечением изучаемого объекта.

источник

Амилоидоз кожи представляет собой метаболическое нарушение, при котором происходит отложение в коже амилоида.

Исследованиями установлено, что амилоид является гликопротеидом белковой природы. Отложение этого белка приводит к нарушению жизнедеятельности тканей и органов.

[1], [2], [3], [4], [5], [6], [7]

Причины и патогенез амилоидоза до конца не изучены. По данным некоторых авторов, в основе заболевания лежит мутация, которая приводит к образованию клона клеток мезенхимального происхождения — амилоидобластов, синтезирующих фибриллярный белок амилоид.

Амилоидоз — мезенхимальный диспротеиноз, сопровождающийся появлением в тканях аномального фибриллярного белка с образованием в межуточной ткани сложного вещества — амилоида.

В.В.Серов и Г.Н.Тихонова (1976), Л.Н. Капинус (1978) показали, что амилоидное вещество представляет собой глюкопротеид, основным компонентом которого является фибриллярный белок (F-компонент). При электронной микроскопии установлено, что фибриллы амилоида имеют диаметр 7,5 нм и длину 800 нм, лишены поперечной исчерченности. Фибриллярный белок синтезируется мезенхимальными клетками — амилоидобластами (фибробластами, ретикулярными клетками). В ткани он соединяется с белками и полисахаридами плазмы крови, которые являются его вторым обязательным компонентом (Р-компонент), в электронном микроскопе он выглядит в виде палочковидных структур диаметром 10 нм и длиной 400 нм, состоящих из пентагональных образований. Фибриллы амилоида и плазменный компонент вступают в соединения с гликозаминогликанами ткани, и к образующемуся комплексу присоединяются фибрин и иммунные комплексы. Фибриллярный и плазменный компоненты обладают антигенными свойствами. G.G. Glenner (1972) считает, что амилоид может возникать из моноклональных легких цепей и иммуноглобулинов, которые входят в состав амилоидных фибрилл независимо от клинической классификации амилоида как при первичном, так и вторичном амилоидозе. G. Husby и соавт. (1974) наряду с этим описывают возникновение амилоидных масс из неиммуногло-булинового белка (амилоид А). Оба вида амилоида, как правило, встречаются вместе.

Морфогенез амилоидоза, по данным В.В. Серова и Г.Н. Тихоновой (1976), В.В. Серова и И.А. Шамова (1977), складывается из следующих звеньев:

1. трансформации элементов макрофагально-гистиоцитарной системы с появлением клона клеток, способных синтезировать фибриллярный компонент амилоида;
2. синтеза фибриллярного белка этими клетками;
3. агрегации фибрилл с образованием «каркаса» амилоидной субстанции и
4. соединения фибриллярного компонента с белками и глюкопротеидами плазмы, а также гликозаминогликанами ткани.

Образование амилоида происходит вне клеток в тесной связи с волокнами соединительной ткани (ретикулиновыми и коллагеновыми), что дает основание выделить два типа амилоида — периретикулярного и периколлагенового. Периретикулярный амилоидоз встречается преимущественно при поражениях селезенки, печени и почек, надпочечников, кишечника, интимы сосудов, а периколлагеновый характерен для амилоидоза адвентиции сосудов, миокарда, поперечнополосатой и гладкой мышечной ткани, нервов и кожи.

Амилоидные массы при окраске гематоксилином и эозином окрашиваются в бледно-розовый, по методу Ван-Гизона — в желтый цвет. Специфический краситель — конго красный окрашивает его в красный цвет. Специальным методом выявления амилоида являются также реакции с тиофлавином Т с последующей иммунофлюоресцентной микроскопией.

В зависимости от причинною фактора, согласно классификации В.В. Серова и И.А. Шамова (1977). амилоидоз подразделяется на следующие формы: идиопатический (первичный), наследственный, приобретенный (вторичный), старческий, локальный (опухолевый).

Кожа наиболее часто поражается при первичном локализованном, затем при первичном системном амилоидозе. При семейных формах амилоидоза кожные изменения менее часты, чем при системном. Изменения кожи при системном амилоидом полиморфны. Чаще встречаются геморрагические высыпания, но более характерными являются асимптомные, желтоватые узелково-нодулярные элементы, располагающиеся преимущественно на лице, шее, груди, а также в полости рта, нередко сопровождающиеся макроглоссией. Могут быть пятнистые, склеродермоподобные, бляшечные очаги, изменения. сходные с кеантоматозными и микседематозными поражениями, в редких случаях — буллезные реакции, алопеция. Вторичный системный амилоидов протекает, как правило, без кожных изменений. Вторичный местный амилоидоз кожи развивается на фоне разнообразных кожных заболеваний, преимущественно в очагах красного плоского лишая и нейродермита.

[8], [9], [10], [11], [12], [13], [14], [15], [16]

При локализованном папулезном амилоидозе в очагах поражения выявляют амилоидные массы, как правило, в сосочковом слое дермы. В свежих очагах поражения отмечаются мелкие агрегаты в редуцированных сосочках кожи или непосредственно под эпидермисом. Эти отложения часто локализуются перикапиллярно, а вокруг них располагаются мгогочисленные ретикулиновые волокна, умеренное число фибробдастов, в некоторых же случаях — хронические воспалительные инфильтраты.

В крупных амилоидных массах видны меланинсодержпшие макрофаги, фибробласты, гистиоциты, иногда лимфоциты. Изредка в утолщенном эпидермисе могут наблюдаться незначительные отложения амилоида. Придатки кожи большей частью интактны.

Гистогенез амилоидного лихена окончательно не выяснен. Имеются данные об эпидермальном происхождении амилоида за счет очагового повреждения эпителиоцитов с превращением их в фибриллярные массы, а затем в амилоид. Об участии кератина в образовании амилоида свидетельствуют реакция амилоидных фибрилл с антителами против человеческого кератина, наличие дисульфидных связей в амилоиде, а также косвенно положительный эффект от применения производных ретиноидной кислоты.

Первичный пятнистый кожный амилоидоз характеризуется появлением значительно зудящих пятен 2-3 см в диаметре, коричневого или бурого цвета, которые локализуются на туловище, но наиболее часто — в верхней части спины, межлопаточной области. Описан случай появления пигментного амилоидоза вокруг глаз. Пятна склонны к слиянию и образовывают гиперпигментные участки. Сетчатая гиперпигментация является характерной особенностью пятнистого амилоидоза. Одновременно с гиперпигментацией могут встречаться гипопигментированные очаги, что напоминает пойкилодермию. Больные жалуются на зуд различной интенсивности. В 18 % случаев зуд может отсутствовать. Одновременно с пятнистыми высыпаниями появляются мелкие узелки (узелковый амилоидоз).

При патоморфологическом исследовании амилоид обнаруживается в сосочковом слое дермы. Описано развитие пятнисто-папулезного амилоидоза у больного, имеющего вирус Эпштейна Барра. После лечения ацикловиром и интерфероном пятнисто-папулезные высыпания значительно рассасались, что подтверждает роль вирусов в отложении амилоида в тканях. Пятнистая форма амилоидоза встречается у взрослых, мужчины и женщины болеют одинаково. Заболевание встречается часто в Азии и на Ближнем Востоке, редко — в Европе и Северной Америке.

Узловато-бляшечная форма является редким вариантом первичного кожного амилоидоза. В основном болеют женщины. Одиночные или множественные узелки и бляшки чаще локализуются на голенях, иногда на туловище и конечностях. На передней поверхности обеих голеней строго симметрично располагаются многочисленные, величиной от булавочной головки до горошины, шаровидные, блестящие узелки, тесно прилегающие друг к другу, но не сливающиеся, и разделенные узкими бороздками здоровой кожи. Некоторые очаги поражения носят характер бородавчатых образований с роговыми наслоениями и чешуйками на поверхности. Высыпания сопровождаются мучительным зудом, визуализируются очаги расчесов и лихенификации кожи. У большинства больных уровень а- и у-глобулинов в сыворотке крови повышен. Описаны сочетания узелково-бляшечного амилоидоза с диабетом, синдромом Шегрена и переход данной формы амилоидоза в системный с вовлечением внутренних органов в патологический процесс.

Обнаруживают значительное отложение амилоида в дерме, подкожном жировом слое, в стенках кровеносных сосудов, базальной мембране потовых желез и вокруг жировых клеток. Массы амилоида могут находиться среди клеток хронического воспалительного инфильтрата, в котором выявляются плазмоциты, а также гигантские клетки инородных тел. При биохимическом анализе в амилоидных фибриллах обнаружены пептиды с молекулярной массой 29 000; 20 000 и 17 000. Иммуноблоттинг выявил окрашивание пептида с молекулярной массой 29 000 антителами к а-цепи иммуноглобулина. Имеются данные о комбинации отложений легких χ- и λ-цепей иммуноглобулинов. Эти материалы свидетельствуют об иммуноглобулиновой природе амилоида при этой форме амилоидоза. Предполагается, что в очагах происходит накопление плазматических клеток, секретирующих легкие L-цепи иммуноглобулинов, которые фагоцитируются макрофагами и превращаются в амилоидные фибриллы Как и в случае нолулярного амилоидоза, при буллезном амилоидозе требуется исключить системный амилоидоз. Своеобразную форму буллезного амилоидоза описали T. Ruzieka и соавт. (1985) Клинически она имеет сходство с атипичным герпетиформным дерматитом за счет зудящей эритемато уртикарной и буллезной сыпи, пятнистой гипер- и депигментации. Имеются также очаги лихенификации и ихтиозиформного гиперкератоза. При гистологическом исследовании отложение амилоида обнаруживают в верхних слоях дермы. По данным электронной микроскопии, пузыри располагаются в зоне светлой пластинки базальной мембраны. Иммуногистохимнческое изучение с использованием антисывороток против различных протеинов фибрилл амилоида и моноклоналышх антител против IgA дало отрицательный результат.

Вторичный системный амилоидоз в коже может развиваться большей частью при различных хронических нагноительных процессах у больных миеломой и плазмоцитомой. Клинические изменения на коже бывают редко, но гистологически при окраске щелочным конго красным в ней можно выявить амилоидные массы, которые в поляризационном микроскопе выглядят зелеными. В этих случаях они могут быть видны вокруг потовых желез, иногда вокруг мешочков волос и жировых клеток.

Вторичный локализованный амилоидоз может развиваться на фоне разнообразных хронических дерматозов, таких как красный плоский лишай, нейродермит, а также некоторых опухолей кожи: себорейная бородавка, болезнь Боуэна и базалиома. При пятнистом амилоидозе, амилоидном лихене, в окружности кератом или эпителиом, при хронической экземе нередко наблюдаются так называемые амилоидные тельца (амилоидные глыбки, амилоидные сгустки). Они чаще локализуются в сосочковом слое дермы, располагаясь при этом в виде больших групп. Иногда отдельные сосочки целиком заполнены гомогенными массами, однако они могут наблюдаться и в более глубоких отделах дермы чаще в виде глыбок. Они эозинофильные, ШИК-положительные, специфично окрашиваются конго красным, в поляризационном микроскопе желтовато-зеленого цвета, флюоресцируют с тиофлавином Т и дают иммунную реакцию со специфическими антисыворотками. Амилоидные тельца часто окружены многочисленными соединительнотканными клетками, отростки которых связаны с ними, в связи с чем некоторые авторы считают, что эти массы продуцируются фибробластами.

Семейный (наследственный) амилоидоз описан как при семейном, так и при локализованном кожном амилоидозе. Описана семья, пораженные члены которой имели гиперпигментацию и сильный зуд. Считают, что заболевание наследуется аутосомно-доминантным путем. Первичный! кожный амилоидоз встречался у однояйцевый близнецов, которые помимо амилоидоза страдали разнообразными врожденными аномалиями. В литературе описаны случаи сочетания кожного амилоидоза с врожденной пахионихией, врожденным дискератозом, ладонно-подошвенной кератодермией, множественными эндокринными дисплазиями и др.

[17], [18], [19], [20], [21], [22], [23]

При патоморфологическом исследовании выявляется диффузное отложение амилоида в коже и подкожно-жировой клетчатке в стенках сосудов, мембранах потовых желез и жировых клеток.

источник

зарегистрируйте свою электронную почту на сайте и получайте дополнительные информационные материалы по аутоиммунной диагностике

где сдать анализ крови на тест анализы спб СПб инвитро Петербург Питер на целиакию аутоиммунные заболевания аутоантитела аутоиммунная диагностика Лапин autoimmun антиядерные лабораторная антинуклеарный фактор антинуклеарные антитела HEp-2 тип волчанка свечения амилоидоз склеродермия иммуноблот ревматоидный цитруллиновый расшифровка экстрагируемые скрининг заболевания смешанное системная СКВ артрит дсДНК CCP ССР АЦЦП саркоидоз антинейтрофильные криоглобулины гранулематозные АНФ АНЦА ANCA ENA иммунофиксация васкулиты Крона целиакия аутоиммунный печени язвенный колит глиадину трансглутаминазе стероидпродуцируюшим Вегенера яичника эндокринопатии пузырные пузырчатка пемфигоид рассеянный склероз миастения миелина белок олигоклональный изоэлектрофокусирования IgG IgA IgM легкие цепи полиневрит ганглиозидам полимиозит парапротеин миелома неоптерин островковые GAD антимитохондриальные гладкие скелетные мышцы ASCA колит антигену фосфолипидный синдром кардиолипину фосфолипидам гликопротеину нуклеосомам SSA SSB RNP Sm CENT Scl Jo-1 АМА антикератиновые антиперинуклеарный MCV LKM-1 рецептору иммунофлюоресценция ИФА иммунологическая лаборатория университет санкт-петербург павлова Чардж-Стросса полиангиит микрокристаллические первичный билиарный цирроз трансглутаминаза трансглютаминаза критерии ревматоидного артрита 2010 года СПб Питер Петербург нейрогенетика

Ig g, антитела к аквапорину 4, СКРИНИНГ М ГРАДИЕНТА, бокаловид, Цистицеркоз, Метод ниф, ANA антитела к ядерным антигенам IgG, РА со стафилококовым антигеном, пируват, кальпротектин, антигемофильный фактор, анализы на скв, Антитела к ацетилхолиновому рецеп, IF SUBSTR version 1 1 5 BENCHMARK 0 SHA1 0xDEADBEEF SLEEP 0, м протеин, анализ крови скрининг на васкулит, 01 02 15 1085, анализ белков сыворотки крови м гр, cnjbvjcnm fyfkbpjd, Антигены Hp ИФА стул, иммунология.

Аутоиммунные заболевания и биопсия кожи

Диагностика аутоиммунных заболеваний кожи

пузырные дерматозы (пузырчатка, пемфигоид, герпетиформный дерматит), кожные формы системных заболеваний

Пузырные дерматозы представляют собой аутоиммунные заболевания, в основе которых лежит иммунный ответ против межклеточных контактов кожи. При вульгарной пузырчатке появляются антитела десмосомам кожи (антиген — десмоглеин 3). Десмосомы представляют собой плотные межклеточные контакты, разрушение которых приводит к образованию интраэпителиальных полостей и отделению клеток друг от друга (акантолитические клетки). Особенность аутоантител при пузырчатке является способность активировать систему комплемента, в результате чего антитела имеют прямое цитотоксическое действие. В отличие от пузырчатки, при пемфигоиде появляются антитела к гемидесмосомам базального слоя. Эти структуры связывают между собой эпидермис и дерму. Как и при пузырчатке антитела обладают способностью фиксировать комплемент. В результате при разрушении гемидесмосом полости образуются на границе эпидермиса и дермы. Так как структуры эпидермиса не нарушены, акантолитические клетки отсутствуют.

Серологическое обследование позволяет выявлять антитела у 70-80% больных с пузырными дерматозами, в то время как у большинства больных с начальными формами и поражением слизистых антитела в крови отсутствуют. В этом случае большой информативностью обладает прямое иммунофлюоресцентное обследование биопсии непораженной кожи. Исследуются уже существующие отложения иммуноглобулинов и комплемента в структурах кожи. Рекомендуется взятие биопсии кожи с помощью одноразовых дерматологических «пробойников» диаметром 3-4 мм, при использовании которых косметический дефекта минимален. Биопсия доставляется в лабораторию в специальной транспортной среде Михаэлиса. Биопсия непораженной кожи с иммунологическим исследованием имеет важное значение в диагностике системной и кожных форм красной волчанки, а также в диагностике герпетиформного дерматита и кожных васкулитов. При красной волчанке на фоточувствительных областях обнаруживается положительный «тест волчаночной полоски», представляющий собой гранулярные отложения иммуноглобулинов (чаще IgM) под базальной мембраной кожи. При герпетиформном дерматите отмечаются округлые отложения IgAв сосочках дермы, а при пурпуре Шонлейн-Геноха в капиллярах выявляются отложения IgA.

Для диагностики поражения кожи и ее придатков на фоне ревматической патологии, полиэндокринопатий, целиакии целесообразно использовать серологическое обследование, после чего должна выполняться биопсия непораженной кожи.

Тест 01.02.15.100 Антитела к десмосомам

Антитела к десмосомам в крови отмечаются при вульгарной, листовидной, лекарственной и паранеопластической пузырчатке у 90% больных. В случае отсутствия антител при яркой клинике необходимо произвести биопсию кожи с иммунофлюоресцентным исследованием.

Тест 01.02.15. 105 Антитела к базальной мембране

Антитела к базальной мембране направлены к гемидесмосомам базального слоя эпителия (белки BP180 и 230). Они отмечаются при буллезном пемфигоиде и его вариантах. Встречаемость антител составляет 75% и обычно должна подтверждаться биопсией кожи.

Комбинированный тест 01.02.15.100 выявляет обе разновидности антиэпителиальных антител.

Тест 01.02.15.315 Иммунофлюоресцентное исследование биопсий кожи (IgG, IgA, IgM, С3, С1q)

В диагностике пузырных дерматозов оно обладает почти 100% чувствительностью и является «золотым стандартом» обследования. Выявляются антитела к межклеточным контактам (пузырчатка), базальной мембране (пемфигоид, пемфигоид беременных, линейный IgA дерматоз, пемфигоид слизистых, буллезный эпидермолиз), IgAв сосочках при герпетиформном дерматите Дюринга, «волчаночная полоска» IgM/IgGпо базальной мембране, отложения IgA в сосудах дермы при пурпуре Шенлейн-Геноха.

источник

Амилоидоз — заболевание с внеклеточным отложением в тканях фибриллярного белка «амилоида», сопровождающееся нарушением функции органов и систем.

Эпидемиология. При аутопсии амидоидоз находят в 2% случаев. АА-амилоидоз (вторичный) находят у 65% больных, AL-амилоидоз — у 30% больных и другие формы — у 5% больных. Заболеваемость зависит от распространенности болезней, при которых он развивается (хронические инфекции, миелодисплазии).

Этиопатогенез. Развитию АА-амилоидоза способствуют хронические гнойные и воспалительные заболевания (остеомиелит, бронхоэктатическая болезнь, туберкулез, ревматоидный артрит, пиелонефрит). Он развивается спустя несколько лет после начала основного заболевания. При АА-амилоидозе амилоид синтезируют макрофаги (амилоидобласты). Его предшественником является острофазовый белок (SAA), который вырабатывается в печени под воздействием ин-терлейкина-1. При резком увеличении SAA усиливается его внутриклеточная деградация и образуются фибриллы амилоида. Конечной стадией является образование амилоидных фибрилл во внеклеточном матриксе.

AL-амилоид синтезируется плазматическими и миеломными клетками из легких цепей (X и к) иммуноглобулинов. Сборка амилоидных фибрилл осуществляется на поверхности макрофагов. К развитию AL-амилоидоза отмечена генетическая предрасположенность.

Причинами редких форм амидоилоза могут быть нарушения синтеза легких цепей иммуноглобулинов и замена аминокислот. Семейный амидоилоз представлен группой аутосомно-доминантных заболеваний, связанных с синтезом мутантных форм белков. Редкие формы амидоилоза связаны с синтезом мутантного транстиретина.

Амилоид — это p-фибриллярный неветвящийся белок и массой 2-20 kD, дающий поперечную сшивку нормальных а-фибриллярных белков ретикулярной и соединительной ткани. С фибриллярной структурой амилоида связывают специфическое окрашивание конго-красным, йодом, метиленовым синим и тиофлавином Т. В амилоиде присутствует Т-компонент (10-15% амилоида), который идентичен при всех формах амилоидоза. Он подобен гликопротеинам плазмы (SAP), относится к острофазовым белкам и его повышение в сыворотке отмечается при ревматоидном артрите, опухолях, заболеваниях печени.

Клиника. Зависит от формы, локализации амилоидных отложений, степени их распространенности в органах и осложнений. Наиболее яркая картина поражения почек, печени, селезенки и кишечника характерна для АА-амилоидоза. Поражение сердца, нервной и эндокринной систем, кожи и суставов характерно для редких изолированных форм. В почках диффузно поражаются базальные мембраны клубочков и сосудов, а также интерстиций, отмечаются гепатомегалия с умеренным нарушением функции печени (увеличение щелочной фосфатазы, снижение выделения бромсульфалеина) и спленомегалия без синдрома гиперспленизма. Поражение желудочно-кишечного тракта сопровождается диареей или запорами, образованием язв, мальабсорбцией. При поражении сердца снижается систолический объем, нарушается предсердно-желудочковая и внутрижелудочковая проводимость, снижается вольтаж зубцов на ЭКГ, поражаются все оболочки, но чаще миокард и эндокард. Для поражения нервной системы характерно развитие автономной нейропатии, церебральных геморрагий, маразма. Изредка поражаются кожа (бледные пятна и папулы на лице и спине, расчесы), суставы (тендовагиниты сгибателей пальцев рук, синовиты), эндокринная система (гипофункция развивается редко).

Выделяют 4 стадии поражения почек при АА-амилоидозе:

I ст. — латентная. Доминируют клинические симптомы основного заболевания и лабораторные данные мало специфичны (минимальная протеинурия, микрогематурия, лейкоцитурия). Характерны повышение СОЭ, гиперглобулинемия, немотивированная слабость и уменьшение массы тела.

II ст. — протеинурическая. Характеризуется постоянной селективной протеинурией. Суточная потеря белка — от 2,0 до 6,6 г. При микроскопии осадок мочи «пустой», но возможны лейкоцитурия, цилиндрурия, микрогематурия. В биоптатах почек — отложение амилоида в клубочках, строме, сосудах и интерсиции в сочетании с гиалиново-капельной и жировой дистрофией эпителия канальцев.

III ст. — нефротическая. Развивается нефротический синдром с высокой неселективной протечнурией, гипопротеинемией (гипоальбуминемия), гиперхолестеринемией и массивными отеками. Протеинурия может достигать 20-30 г/л, а гипоальбуминемия — 15 г/л. Альбумино-глобулиновый коэффициент снижается до 0,5 и ниже. Характерен квашиоркоровский тип белково-энергетической недостаточности (БЭН), что связано с протеинурией и поражением кишечника. По данным УЗИ, почки увеличены в размерах. Часты тромбозы (нарушение свертывания), анемия и тяжелая инфекция, от чего многие больные погибают.

IV ст. — терминальная (азотемическая, уремическая). Появляется азотемия (креатинин сыворотки более 0,18 мМ/л), быстро переходящая в уремию. По данным УЗИ, ночки увеличены, что не характерно для больных гломерулонефритом. ХПН активно прогрессирует, что связано с инфекцией, гипотонией и БЭН.

При AL-амилоидозе увеличивается язык и почти всегда поражается желудочно-кишечный тракт. Из-за гипергидратации расширяются полости сердца и прогрессирует сердечная недостаточность. При рестриктивной кардиомиопатии и перикардите сердце небольшое. Артериальное давление имеет тенденцию к снижению. Поражение почек отмечается лишь у 30—40% больных, и развитие стадий заболеваний, свойственных АА-амиоидозу, не характерно. Старческий амилоидоз выявляется у пожилых, ведет к прогрессирующему слабоумию (синдрому Альцгеймера) и поражению сердца.

Ассоциированный с миеломой и парапротеинозами

При периодической болезни